哺乳類体細胞分裂期における核膜再構築機構の解析

哺乳动物体细胞分裂过程中核膜重塑机制分析

基本信息

批准号：
08780679
负责人：
松岡洋祐
金额：
$ 0.64万
依托单位：
Osaka University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
财政年份：
1996
资助国家：
日本
起止时间：
1996 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-08780679/
关键词：
核膜核膜孔複合体細胞分裂

项目摘要

分裂期Hela細胞の抽出液をいくつかの画分に分画し、それらを抗原として抗核膜抗体を調製したところ、核膜孔を認識するモノクローナル抗体(MY95)が得られた。核膜孔には核膜孔複合体(NPC)と呼ばれる分子量約125MDa、100種類以上の蛋白質からなる巨大な複合体が存在し、これが核膜孔における物質輸送を制御している。細胞分裂期には核膜の崩壊とともにNPCも崩壊し分裂間期に向かう過程で再構築される。NPCの崩壊と再構築が正しく行われなければ細胞は致死となるので、この崩壊、再構築には精巧な制御機構が存在すると考えられる。哺乳類体細胞分裂期における核膜再構築機構の解析をNPCの崩壊と再構築の解析という観点から行った。NPCは100種類以上の蛋白質からなる複合体だがMY95は主としてそのうちの三種類の蛋白質を認識した。次にこの抗体を用いて分裂期における核膜孔複合体の存在様式を明らかにするため分裂期細胞抽出液をゲル濾過法で分画して解析した。その結果、これらの蛋白質を含む分子量400kDa以上のサブコンプレックスが少なくとも三種類存在することが明らかとなった。各サブコンプレックス構成蛋白質のうち、いくつかをイオン交換カラム、ゲル濾過カラム、電気泳動法で完全精製し、アミノ酸配列の決定を行っている。今回得られた結果により細胞分裂期におけるNPCの存在様式を把握でき、これは今後NPCの崩壊、再構築機構を解析する上での基礎データとして重要なものである。

将有丝分裂HeLa细胞的提取物分级为几个馏分，并使用这些提取物用它们作为抗原制备抗核抗体，从而产生单克隆抗体（MY95），识别核孔。核孔是一种称为核孔复合物（NPC）的巨大复合物，该复合物由100多种蛋白质组成，分子量约为125 MDA，该蛋白质控制着核孔中的材料转运。在细胞分裂阶段，NPC也随核膜塌陷而崩溃，并在它们向间歇阶段移动时被重建。如果NPC无法正确分解和重建，则细胞将致命，并且据信将有一种瓦解和重建的精心调节机制。从分析NPC衰减和重建的角度进行了哺乳动物体细胞分裂期核重建机制的分析。 NPC是由100多种蛋白质组成的复合物，但MY95主要识别了其中三种蛋白质。接下来，使用这种抗体，对有丝分裂细胞提取物进行分级并通过凝胶过滤分析，以阐明有丝分裂阶段核孔复合物的存在方式。结果，已经揭示了至少包含这些蛋白质的三种类型的子复合物的分子量为400 kDa或更多。在构成子复合物的蛋白质中，几种由离子交换柱，凝胶过滤柱和电泳完全纯化，以确定氨基酸序列。这次获得的结果使我们能够了解细胞分裂阶段中NPC的存在，这对于将来分析NPC衰减和重建机制的基本数据很重要。