哺乳類体細胞分裂期における核膜再構築機構の解析

哺乳动物体细胞分裂过程中核膜重塑机制分析

• 批准号: 08780679
• 负责人: 松岡 洋祐
• 金额: $ 0.64万
• 依托单位: Osaka University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1996
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1996 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-08780679/
• 关键词: 核膜; 核膜孔複合体; 細胞分裂

分裂期Hela細胞の抽出液をいくつかの画分に分画し、それらを抗原として抗核膜抗体を調製したところ、核膜孔を認識するモノクローナル抗体(MY95)が得られた。核膜孔には核膜孔複合体(NPC)と呼ばれる分子量約125MDa、100種類以上の蛋白質からなる巨大な複合体が存在し、これが核膜孔における物質輸送を制御している。細胞分裂期には核膜の崩壊とともにNPCも崩壊し分裂間期に向かう過程で再構築される。NPCの崩壊と再構築が正しく行われなければ細胞は致死となるので、この崩壊、再構築には精巧な制御機構が存在すると考えられる。哺乳類体細胞分裂期における核膜再構築機構の解析をNPCの崩壊と再構築の解析という観点から行った。NPCは100種類以上の蛋白質からなる複合体だがMY95は主としてそのうちの三種類の蛋白質を認識した。次にこの抗体を用いて分裂期における核膜孔複合体の存在様式を明らかにするため分裂期細胞抽出液をゲル濾過法で分画して解析した。その結果、これらの蛋白質を含む分子量400kDa以上のサブコンプレックスが少なくとも三種類存在することが明らかとなった。各サブコンプレックス構成蛋白質のうち、いくつかをイオン交換カラム、ゲル濾過カラム、電気泳動法で完全精製し、アミノ酸配列の決定を行っている。今回得られた結果により細胞分裂期におけるNPCの存在様式を把握でき、これは今後NPCの崩壊、再構築機構を解析する上での基礎データとして重要なものである。

Hela cell extract at mitotic stage is divided into two parts, namely, antigen and anti-nuclear membrane antibody, and anti-nuclear membrane antibody (MY95) is obtained. Nuclear pore complex (NPC) is a protein complex with molecular weight of about 125MDa and more than 100 species. During cell division, the nuclear membrane collapses and NPC reconstructs during interphase. NPC's collapse and re-construction are both positive and negative. The cells are lethal, and the collapse and re-construction are delicate. Analysis of nuclear membrane reconstruction mechanism during mammalian somatic cell division NPC has more than 100 kinds of protein complex and 95 kinds of protein. The expression of the nuclear pore complex in mitotic cells was analyzed by filtration method. As a result, there are three kinds of proteins with molecular weight of more than 400kDa. The composition of each protein is determined by the following methods: complete purification by electrokinetic method, determination of acid alignment, and so on. The results of this review are important for understanding the existence of NPC during cell division, and for analyzing the structure of NPC in the future.