肺高血圧症における新たな機序の解明：エンドセリン受容体におけるβアレスチンの役割

阐明肺动脉高压的新机制：β-抑制素在内皮素受体中的作用

• 批准号: 22K08119
• 负责人: 花田 賢二
• 金额: $ 2.75万
• 依托单位: Hirosaki University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• 财政年份: 2022
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2022-04-01 至 2025-03-31
• 项目状态: 未结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-22K08119/
• 关键词: 肺高血圧症; βアレスチン

in vitroの系においては、ヒト肺動脈平滑筋細胞を購入、培養し、研究を行った。まずはsiRNAを用いてβアレスチン1またはβアレスチン2をノックダウンした。ウエスタンブロットおよび定量的PCRにて良好なβアレスチン1、またはβアレスチン2ノックダウンを確認した。次に、エンドセリンを用いてヒト肺動脈平滑筋細胞を刺激し、extracellular-related kinase(ERK)およびAktのリン酸化を測定し、βアレスチン1またはβアレスチン2のノックダウンの効果を検討した。エンドセリン刺激によるERKのリン酸化はβアレスチン1またはβアレスチン2のノックダウンにより亢進していた一方で、Aktのリン酸化はβアレスチン2のノックダウンでのみ亢進していた。炎症性サイトカインであるTumor necrosis factor-α、Transforming Growth Factor-βの発現およびコラーゲン3a1の発現はβアレスチン2のノックダウンで亢進していたのに対し、βアレスチン1のノックダウンでは差を認めなかった。in vivoの系においては、野生型マウスに対してモノクロタリンを8週間投与することによって、肺高血圧症を誘導した。モノクロタリンの投与によって、右室肥大、およりMillarカテーテルで測定した右室圧の上昇を認めた。また組織学的には、肺小細動脈の肥厚、および動脈壁への炎症細胞の浸潤を認めた。

在体外系统中，购买，培养和研究了人类肺动脉平滑肌细胞。首先，siRNA用于击倒β-arrestin 1或β-arrestin 2。良好的β-arrestin 1或β-arrestin 2敲低被Western blot和定量PCR证实。接下来，使用内皮素来刺激人类肺动脉平滑肌细胞，测量细胞外相关激酶（ERK）和AKT的磷酸化，并研究了β-arrestin 1或β-arrestin 2的敲低影响。通过敲低β-arrestin 1或β-arrestin 2，通过内皮素刺激对ERK的磷酸化增加了，而Akt的磷酸化仅通过敲低β-arrestin 2的敲低而增加Akt的磷酸化。在β-arrestin 1。在体内系统中，通过给野生型小鼠的单蛋白促进肺高血压8周。施用单激素显示出右心肥大和用Okari Millar导管测量的右心压增加。在组织学上，观察到肺微动菌的增厚，并观察到炎症细胞进入动脉壁。

项目成果

The effects of beta-arrestins on the endothelin receptor signaling: possible role in the pathogenesis of pulmonary arterial hypertension

β-抑制素对内皮素受体信号传导的影响：在肺动脉高压发病机制中的可能作用

• 发表时间: 2023
• 作者: 加藤和史;花田賢二
• 通讯作者: 花田賢二