甲状腺ホルモン生合成調節機構における硫酸化とその機能の解明

本研究は、Tgの硫酸化が甲状腺ホルモン生合成に及ぼす影響について明らかにし、甲状腺濾胞機能調節機能の全体像を明らかにすることが目的である。初年度である2022年度は、以前行ったラット甲状腺FRTL-5細胞を用いて行ったDNAマイクロアレイの結果の再解析を行い、甲状腺機能遺伝子調節因子であるTSHの添加によって、変動がみられた硫酸化にかかわる遺伝子を抽出した。TSHにより、Sult1a1をはじめ、Sult1d1、Sult5a1、Tpst1、Tpst2、Chest12などの硫酸化に関わる遺伝子に変動がみられた。特に、Sult1a1はTSHによる強い発現抑制がみられた。Sult1a1は甲状腺ホルモンの硫酸化を触媒する主要な酵素である。DNAマイクロアレイの結果をもとに、real-time PCRおよびwestern blottingを用いて、TSHによるSult1a1のmRNAおよびタンパク発現の影響についてFRTL-5細胞を用いて実験を行った。Sult1a1はTSHの濃度依存性、時間依存性に遺伝子およびタンパク発現が抑制されるという結果が得られた。さらに、TSHによるcAMPシグナル経路を介した反応であることを確認するためにforskolinとdbcAMPを用いて実験を行った。FRTL-5細胞をforskolinとdbcAMPにより刺激したところ、濃度依存性および時間依存性にmRNAの発現が強く抑制される結果が得られた。

本研究は、Tgの硫酸化が甲状腺ホルモン生合成に及ぼす影響について明らかにし、甲状腺濾胞機能調節機能の全体像を明らかにすることが目的である。初年度である2022年度は、以前行ったラット甲状腺FRTL-5細胞を用いて行ったDNAマイクロアレイの結果の再解析を行い、甲状腺機能遺伝子調節因子であるTSHの添加によって、変動がみられた硫酸化にかかわる遺伝子を抽出した。TSHにより、Sult1a1をはじめ、Sult1d1、Sult5a1、Tpst1、Tpst2、Chest12などの硫酸化に関わる遺伝子に変動がみられた。特に、Sult1a1はTSHによる強い発現抑制がみられた。Sult1a1は甲状腺ホルモンの硫酸化を触媒する主要な酵素である。DNAマイクロアレイの結果をもとに、real-time PCRおよびwestern blottingを用いて、TSHによるSult1a1のmRNAおよびタンパク発現の影響についてFRTL-5細胞を用いて実験を行った。Sult1a1はTSHの濃度依存性、時間依存性に遺伝子およびタンパク発現が抑制されるという結果が得られた。さらに、TSHによるcAMPシグナル経路を介した反応であることを確認するためにforskolinとdbcAMPを用いて実験を行った。FRTL-5細胞をforskolinとdbcAMPにより刺激したところ、濃度依存性および時間依存性にmRNAの発現が強く抑制される結果が得られた。