インクレチンホルモンによるGLUT4小胞輸送促進作用における分子生物学的解析

肠促胰岛素激素促进GLUT4囊泡运输的分子生物学分析

• 批准号: 22K10149
• 负责人: 長野 公喜
• 金额: $ 2.75万
• 依托单位: Kyushu University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• 财政年份: 2022
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2022-04-01 至 2025-03-31
• 项目状态: 未结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-22K10149/
• 关键词: インクレチン; GLUT4; インスリン

われわれは、脂肪細胞や筋細胞において、開口分泌調節タンパク質 tomosyn がインスリン依存性の糖取り込みを調節することを遺伝子組み換 え技術を用いながら示してきた。一方、これらの細胞への糖取り込みはインクレチンホルモンの一つである GIP によって直接促進されること が近年明らかにされてきたが、詳細な分子機序については不明のままである。本研究では GIP による糖取り込み促進作用における tomosyn の 関与を明らかにし、その分子メカニズムを解明する。これにより、糖尿病治療の新たな創薬ターゲットと成り得る候補分子の発 見につながり、今後の糖尿病研究に影響を与えると考えられる。2022年度は GIP による tomosyn S760 のリン酸化の影響を調べた。脂肪細胞や筋管細胞内で GIP 刺激に対する tomosyn のリン酸化の有無を確認した。次に脂肪細胞に分化させた 3T3-L1 細胞あるいは筋管細胞に分化させた C2C12 細胞に FLAG タグを付加した tomosyn 野生体、S760をアラニンに置換しリン酸化できないように組み換えた変異体 (S760A) をそれぞれ遺伝子導入し、32Pラベルされた ATP を取り込ませ、GIP 刺激した後に抗 FLAG 抗体によって tomosyn を免疫沈降し、その放射活性をオートラジオクラフィーで比較、定量した。遺伝子導入方法は、 これまでに実験実績のある、リポフェクションによって遺伝子を一過性に強制発現させる手法を用いた。

The regulation of fat cells and muscle cells, the regulation of their secretion, and the regulation of their sugar dependence. In recent years, GIP has been directly promoted by the development of cell sugar, and the detailed molecular mechanism has been unknown. This study is aimed at clarifying the relationship between tomosyn and GIP and its molecular mechanisms. This is a new approach to diabetes treatment. It is a new approach to diabetes treatment. In 2022, the impact of GIP on tomosyn S760 acidification was adjusted. The presence or absence of GIP stimulation in adipocytes and tendon cells was confirmed. Next, adipocyte differentiation, 3T3-L1 cell differentiation, 32P cell differentiation, C2C12 cell differentiation, FLAG addition, tomosyn wild type, S760 replacement, acidification, and heterogeneic (S760A) combination. Anti-FLAG antibodies were detected after GIP stimulation, and their activity was compared and quantified. The method of gene introduction includes the following steps: firstly, to realize the gene expression, secondly, to realize the gene expression, and thirdly, to realize the gene expression.