Anti-inflammatory mechanisms via hyperpolarization-activated cyclic nucleotide-gated channel subtypes

通过超极化激活的环核苷酸门控通道亚型的抗炎机制

• 批准号: 22K10169
• 负责人: 宮脇 卓也
• 金额: $ 2.66万
• 依托单位: Okayama University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• 财政年份: 2022
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2022-04-01 至 2025-03-31
• 项目状态: 未结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-22K10169/
• 关键词: 過分極活性化環状ヌクレオチド依存性チャネル; 抗炎症作用; サイトカイン; サイトカイ ン

電位依存性チャネルのひとつである過分極活性化環状ヌクレオチド依存性チャネル（Hyperpolarization-activated cyclic nucleotide-gated channels: HCNチャネル）には、HCN1、HCN2、HCN3、およびHCN4のサブタイプがあることが知られている。本年度の研究では、培養したマウスマクロファージ様細胞（RAW264.7細胞）におけるHCNチャネルサブタイプの遺伝子発現を確認し、特定のHCNチャネルサブタイプ遺伝子をノックダウンすることで、HCNチャネル阻害薬（イバブラジン）による抗炎症作用がどのHCNチャネルサブタイプを介しているかを調べることを目的した。RAW264.7細胞からRNAを抽出し、逆転写反応により得られたcDNAを、HCNチャネルのサブタイプであるHCN1、HCN2、HCN3、およびHCN4の遺伝子（mRNA）発現を同定した結果、RAW264.7細胞にはHCNチャネルサブタイプのうちHCN2およびHCN3チャネル遺伝子が主に発現していることがわかった。さらに、LPSやイバブラジンの添加が、これらの遺伝子発現に影響がないことを確認した。次に、LPSを添加して培養したRAW264.7細胞に対して、イバブラジンを添加した場合の、炎症性メディエータ（TNFalpha, IL-6）の産生に対する影響を調べた結果、イバブラジンはこれらの炎症性メディエータの産生を抑制したが、HCN2チャネル遺伝子に対して特異的なsiRNAを導入して、HCN2チャネル遺伝子をノックダウンしたところ、炎症性メディエータ産生の抑制がリバースされたことから、HCNチャネル阻害薬（イバブラジン）の抗炎症作用はHCN2チャネルを介している可能性が示唆された。

Potential dependence チャネ ひと ひと ひと である である hyperpolarity-activated cyclic ヌ <s:1> レ チド チド チド チャネ チャネ (hyperpolarity-activated cyclic nucleotide-gated channels:) HCN チ ャ ネ ル) に は, HCN1, engineered, HCN3, お よ び HCN4 の サ ブ タ イ プ が あ る こ と が know ら れ て い る. This annual の study で は, cultivating し た マ ウ ス マ ク ロ フ ァ ー ジ others in cells (RAW264.7 cells) に お け る HCN チ ャ ネ ル サ ブ タ イ プ の heritage 伝 発 を now confirm し, specific の HCN チ ャ ネ ル サ ブ タ イ プ heritage 伝 son を ノ ッ ク ダ ウ ン す る こ と で, HCN チ ャ ネ ル resistance against 薬 (イ バ ブ ラ ジ ン) に よ る anti-inflammatory Role が ど の HCN チ ャ ネ ル サ ブ タ イ プ を interface し て い る か を adjustable べ る こ と を purpose し た. を RAW264.7 cells か ら RNA extraction し, inverse planning write 応 に よ り have ら れ た cDNA を, HCN チ ャ ネ ル の サ ブ タ イ プ で あ る HCN1, engineered, HCN3, お よ び HCN4 の heritage 伝 child (mRNA) 発 を now be し た results, RAW264.7 cells に は HCN チ ャ ネ ル サ ブ タ イ プ の う ち engineered お よ び HCN3 チ ャ ネ ル posthumous son 伝 が main に 発 now し て い る こ と が わ か っ た. さ ら に, LPS や イ バ ブ ラ ジ ン の add が, こ れ ら の posthumous son 伝 発 に now affect が な い こ と を confirm し た. に, LPS を add し て cultivate し た RAW264.7 cells に し seaborne て, イ バ ブ ラ ジ ン を add し の た occasions, inflammatory メ デ ィ エ ー タ (TNFalpha, IL - 6) の produce に す seaborne る influence を adjustable べ た results, イ バ ブ ラ ジ ン は こ れ ら の inflammatory メ デ ィ エ ー タ の を an adverse し た が, engineered チ ャ ネ ル posthumous son 伝 に し seaborne て specific な siRNA を import し て, engineered チ ャ ネ ル posthumous son 伝 を ノ ッ ク ダ ウ ン し た と こ ろ, inflammatory メ デ ィ エ ー タ の an adverse が リ バ ー ス さ れ た こ と か ら, HCN チ ャ ネ ル resistance against 薬 (イ バ ブ ラ ジ ン) の antiinflammatory effects は engineered チ ャ ネ ル を interface し て い が る possibility in stopping さ れ た.

项目成果

HCNチャネル遮断薬はどのアイソフォームを介して抗炎症作用を示すのか

HCN 通道阻滞剂通过哪些异构体发挥抗炎作用？

• 发表时间: 2022
• 作者: 三宅沙紀;松田怜奈;樋口 仁;宮脇卓也
• 通讯作者: 宮脇卓也