Anti-inflammatory mechanisms via hyperpolarization-activated cyclic nucleotide-gated channel subtypes

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電位依存性チャネルのひとつである過分極活性化環状ヌクレオチド依存性チャネル（Hyperpolarization-activated cyclic nucleotide-gated channels: HCNチャネル）には、HCN1、HCN2、HCN3、およびHCN4のサブタイプがあることが知られている。本年度の研究では、培養したマウスマクロファージ様細胞（RAW264.7細胞）におけるHCNチャネルサブタイプの遺伝子発現を確認し、特定のHCNチャネルサブタイプ遺伝子をノックダウンすることで、HCNチャネル阻害薬（イバブラジン）による抗炎症作用がどのHCNチャネルサブタイプを介しているかを調べることを目的した。RAW264.7細胞からRNAを抽出し、逆転写反応により得られたcDNAを、HCNチャネルのサブタイプであるHCN1、HCN2、HCN3、およびHCN4の遺伝子（mRNA）発現を同定した結果、RAW264.7細胞にはHCNチャネルサブタイプのうちHCN2およびHCN3チャネル遺伝子が主に発現していることがわかった。さらに、LPSやイバブラジンの添加が、これらの遺伝子発現に影響がないことを確認した。次に、LPSを添加して培養したRAW264.7細胞に対して、イバブラジンを添加した場合の、炎症性メディエータ（TNFalpha, IL-6）の産生に対する影響を調べた結果、イバブラジンはこれらの炎症性メディエータの産生を抑制したが、HCN2チャネル遺伝子に対して特異的なsiRNAを導入して、HCN2チャネル遺伝子をノックダウンしたところ、炎症性メディエータ産生の抑制がリバースされたことから、HCNチャネル阻害薬（イバブラジン）の抗炎症作用はHCN2チャネルを介している可能性が示唆された。