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Anti-inflammatory mechanisms via hyperpolarization-activated cyclic nucleotide-gated channel subtypes

通过超极化激活的环核苷酸门控通道亚型的抗炎机制

基本信息

批准号：
22K10169
负责人：
宮脇卓也
金额：
$ 2.66万
依托单位：
Okayama University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
财政年份：
2022
资助国家：
日本
起止时间：
2022-04-01 至 2025-03-31
项目状态：
未结题

项目摘要

電位依存性チャネルのひとつである過分極活性化環状ヌクレオチド依存性チャネル（Hyperpolarization-activated cyclic nucleotide-gated channels: HCNチャネル）には、HCN1、HCN2、HCN3、およびHCN4のサブタイプがあることが知られている。本年度の研究では、培養したマウスマクロファージ様細胞（RAW264.7細胞）におけるHCNチャネルサブタイプの遺伝子発現を確認し、特定のHCNチャネルサブタイプ遺伝子をノックダウンすることで、HCNチャネル阻害薬（イバブラジン）による抗炎症作用がどのHCNチャネルサブタイプを介しているかを調べることを目的した。RAW264.7細胞からRNAを抽出し、逆転写反応により得られたcDNAを、HCNチャネルのサブタイプであるHCN1、HCN2、HCN3、およびHCN4の遺伝子（mRNA）発現を同定した結果、RAW264.7細胞にはHCNチャネルサブタイプのうちHCN2およびHCN3チャネル遺伝子が主に発現していることがわかった。さらに、LPSやイバブラジンの添加が、これらの遺伝子発現に影響がないことを確認した。次に、LPSを添加して培養したRAW264.7細胞に対して、イバブラジンを添加した場合の、炎症性メディエータ（TNFalpha, IL-6）の産生に対する影響を調べた結果、イバブラジンはこれらの炎症性メディエータの産生を抑制したが、HCN2チャネル遺伝子に対して特異的なsiRNAを導入して、HCN2チャネル遺伝子をノックダウンしたところ、炎症性メディエータ産生の抑制がリバースされたことから、HCNチャネル阻害薬（イバブラジン）の抗炎症作用はHCN2チャネルを介している可能性が示唆された。

Potential-dependent cycle generation (Hyperpolarization-activated cyclic nucleotide-gated channels: HCN cycle generation), HCN1, HCN 2, HCN 3, HCN4, HCN 4, HCN1, HCN2, HCN3, HCN 4, HCN3, HCN 4, HCN4, HCN, HCN, This year's study aimed to confirm the development of HCN production proteins in cultured cells (RAW264.7 cells) and to modulate the anti-inflammatory effects of HCN production proteins in specific HCN production proteins. RAW264.7 cells contain RNA, reverse transcription, cDNA, HCN, HCN. The addition of LPS to the system and the identification of the effects of the presence of LPS on the development of the virus are confirmed. In addition, LPS was added to RAW264.7 cells, which were cultured in vitro. In addition, LPS was added to RAW264.7 cells, which were cultured in vitro.(TNFalpha, IL-6) is produced in response to the effects of modulation of results, inhibition of inflammatory response, HCN2-induced response to specific siRNA, HCN2-induced response to inflammatory response, inhibition of inflammatory response The anti-inflammatory effect of HCN receptor inhibitors is an indication of the possibility of HCN2 receptor activation.