黄色ブドウ球菌由来鉄獲得蛋白質Isdの蛍光バイオセンサー化と阻害剤探索法の構築

金黄色葡萄球菌铁获取蛋白Isd荧光生物传感器的开发及抑制剂搜索方法的构建

基本信息

  • 批准号:
    13J07399
  • 负责人:
  • 金额:
    $ 1.91万
  • 依托单位:
  • 依托单位国家:
    日本
  • 项目类别:
    Grant-in-Aid for JSPS Fellows
  • 财政年份:
    2013
  • 资助国家:
    日本
  • 起止时间:
    2013-04-01 至 2015-03-31
  • 项目状态:
    已结题

项目摘要

本研究課題では、薬剤耐性黄色ブドウ球菌に対する創薬標的であるIsd蛋白質を化学修飾によって蛍光センサーへと変換し、Isd蛋白質同士のヘム受け渡し挙動を蛍光追跡することを目的としている。しかしながら本研究の遂行にあたっては、効率的かつ部位特異的な蛋白質化学修飾や、質量分析による修飾蛋白質のキャラクタライズなど、実験の技術的難度が高いことが研究遂行の妨げとなると考えられた。そこで私は世界最先端の蛋白質修飾技術と質量解析技術を習得することを目的として、平成25年5月よりカリフォルニア工科大学、Hsieh-Wilson研究室に留学した。Hsieh-Wilson研ではO-GlcNAc化蛋白質を特異的に標識する手法が開発されている。私はこの手法と定量的質量分析技術であるSILAC法を組み合わせ、正常細胞とガン細胞間でのO-GlcNAc化プロテオームの定量比較解析を試みた。実験には、通常細胞と比較して細胞内O-GlcNAc修飾が亢進しているという報告のあるKRas変異ガン細胞を用いて評価を行った。これらの細胞中のO-GlcNAc蛋白質にアフィニティタグを特異的に導入し、このタグに対する抗体を用いて精製濃縮を行った後、質量分析を行った。その結果、多くのO-GlcNAc蛋白質が同定され、さらにそのいくつかは、KRas変異細胞と天然型細胞で発現量が大きく異なることが見出された。今後は、これらの蛋白質の活性と腫瘍形成機構の関連性を検証する予定である。以上の実験を通じて、蛋白質化学修飾に必要な最先端の知識や手技を習得することができた。この経験は今後の研究課題遂行に大いに役立つと考えている。
In this study, Isd protein and Isd protein were detected by UV, UV and UV. In this study, the chemical modification of protein, the study of technology and technology were studied in this study. I am the first in the world to study protein, technology, technology, analysis, technology, technology, protein, protein Hsieh-Wilson has developed a method of identification of O-GlcNAc protein products to promote the development of information technology. Quantitative analysis by means of quantitative analysis techniques and SILAC methods. Tissue culture, normal cell culture, O-GlcNAc assay, quantitative analysis and quantitative analysis. In general, there is a higher concentration of intracellular O-GlcNAc than that in the cell. The report reports that the cell has a higher activity than the cell. The O-GlcNAc protein in the cell was detected by Elisa, and the antibody was detected by quantitative analysis after the specific antibody was used. The results showed that the expression of O-GlcNAc protein was the same as that of O-GlcNAc protein, and that of KRas protein was higher than that of natural cells. In the future, it is necessary to determine the formation mechanism of protein activity. The above information about chemistry is necessary, and the knowledge of hand skills is very important. In the future, the research project will be carried out in the future.

项目成果

期刊论文数量(0)
专著数量(0)
科研奖励数量(0)
会议论文数量(0)
专利数量(0)
Labeling Proteins by Affinity-guided DMAP Chemistry
通过亲和力引导的 DMAP 化学标记蛋白质
  • DOI:
    10.1007/978-1-4939-2272-7_16
  • 发表时间:
    2015
  • 期刊:
  • 影响因子:
    0
  • 作者:
    Tomonori Tamura;Itaru Hamachi
  • 通讯作者:
    Itaru Hamachi
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  • 作者:
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  • 通讯作者:
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知道了