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ラット頭頂骨骨欠損での骨芽細胞成熟過程におけるTGF-βレセプター発現の役割

TGF-β受体表达在大鼠顶骨缺损成骨细胞成熟过程中的作用

基本信息

批准号：
08877287
负责人：
奥田一博
金额：
$ 1.34万
依托单位：
Niigata University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Exploratory Research
财政年份：
1996
资助国家：
日本
起止时间：
1996 至 1997
项目状态：
已结题

项目摘要

ラット頭頂骨実験的骨欠損におけるTGF-βレセプター発現の役割を検討する前段階として正常硬組織中におけるTGF-βの標的細胞を同定する為に、ラット脛骨骨端板軟骨におけるTGF-βII型レセプターの遺伝子発現、および局在について分子生物学的、免疫組織化学的に検討した。実験動物には成長期に相当する3週齢のWistar系雄性ラット31匹を用いた。このうち20匹は実体顕微鏡下にて脛骨近位骨端板軟骨のみを採取し、AGPC法に基づき総RNAを抽出後、RT-PCR(Reverse Transcriptase-Polymerase Chain Reaction)法にてTGF-βII型レセプターのmRNAの発現を検索した。11匹は脛骨を摘出しパラフィン包埋後、6mumの矢状断薄切標本を作製した。この標本上でジゴキシゲニン標識RNAプローブを用いたin situ hybridization法のよる遺伝子発現の検索と、蛋白レベルでの局在を明らかにするために抗ヒトTGF-βII型レセプターポリクローナル抗体を用いた間接法による免疫組織化学染色による検討を行った。TGF-βII型レセプターのmRNAはRT-PCR法によりラット脛骨近位骨端板軟骨で発現が示された。in situ hybridization法と免疫組織化学染色の結果では、骨端板軟骨の増殖軟骨細胞下層成熟軟骨細胞層から肥大化軟骨細胞層の軟骨細胞細胞幕表面に一致してTGF-βII型レセプターの発現および局在が認められた。一方、内骨膜面では骨に配列する骨芽細胞には局在が認められず、骨芽細胞に近接した扁平な間葉系細胞の一部に局在が認められた。TGF-βII型レセプターはシグナル伝達に関与する重要なレセプターであるが、この研究の結果よりTGF-β-の主たる標的細胞は、軟骨細胞では分化し基質産生を行っている成熟軟骨細胞であり、骨芽細胞系細胞では分化した骨芽細胞ではなくむしろ前骨芽細胞であるとが明らかとなった。よって、軟骨細胞や骨芽細胞は自身から産生されるTGF-βによって、オートクリン、パラクリン機構により、その増殖分化、及び基質産生に関与することが示された。

The expression of TGF- β in normal hard tissue is the same as that in normal hard tissue, and the expression of TGF- β β in the end plate of normal hard tissue is the same as that in normal hard tissue. The results showed that the expression of TGF- β in the end plate of bone was detected in molecular biology and immuno-histochemistry. The animals have grown up for a long time and have been used for a long time. There are 31 males of the Wistar line. After the proximal end plate of the bone was removed, the AGPC method was used to extract the bone RNA, and the RT-PCR (Reverse Transcriptase-Polymerase Chain Reaction) method was used to detect the TGF- β II phenotype after the extraction of the proximal bone end plate. After 11 patellar bones were removed and embedded, the sagittal cut and thin cut marks of the 6mum were used to make the scaffold. In the label book, the RNA antibody was detected by the in situ hybridization method, and the protein antibody was detected by immunocytochemical staining. The proximal bone end plate of TGF- β type II bone was detected by mRNA RT-PCR method and the proximal end plate of bone was found. The results of immunocytochemical staining by in situ hybridization method showed that the subcellular maturation and hypertrophy of the subcellular mature bone of the bone end plate showed that the surface of the cell curtain of the bone cell was consistent with that of TGF- β type II trophoblast. On the one hand, the inner periosteal surface was arranged with the bone, the bone bud was arranged in the bone, and the bone bud was close to the bone in the inner periosteum, and the bone bud was adjacent to the flat cell. The results of the study showed that the cells of TGF- β-type II bone marrow cells were differentiated from mature bone cells, bone bud cells, bone bud cells, bone buds, bone buds. The cells of bone and bone, the bone buds, the bone buds, the bone buds.