体液中の病原微生物の定量的計測法に関する研究

体液病原微生物定量测定方法研究

• 批准号: 08877352
• 负责人: 江崎 孝行
• 金额: $ 1.28万
• 依托单位: Gifu University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Exploratory Research
• 财政年份: 1996
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1996 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-08877352/
• 关键词: フローサイトメーター; レーザー蛍光顕微鏡; 病原細菌; 菌数測定

細菌数を培養せずに計測することを目標とした本研究は液体に浮遊させた細菌の数をレーザー蛍光顕微鏡及びフローサイトメーターの最新技術を利用して定量することを目指した。1ミクロン前後の大きさの細菌を拡散光で分析する際の問題点は、非生物系の微粒子を除くことにあったが、生物粒子はエラスターゼと蛍光基質、死菌はDNAを染めるエチジウムブロマイドを使用することで解決できた。従来型のフローサイトメーターでは、粒子の経が数ミクロン以上なければ正確な計測はできなかった。従来型はキャピラリー管の中を細胞が通過する際に生じる散乱光をもとに計測していたが、この方法を膜面に粒子を含んだ液体をふきつけ、その表面を流れ落ちる粒子を測定する新しいタイプのフローサイトメーターを使用すれば、0.2ミクロンの大きさまで計測できることがわかった。従って生命体をエラスターゼで選択し、その中の粒子を測定することで0.5ミクロン以上ある一般細菌の総数を計測できることがわかった。一方、レーザー蛍光顕微鏡を使用した測定では生命体をエラスターゼで測定し、死滅した細菌粒子をエチジウムブロマイドで染める方法を組み合わせることで液体中に存在する細菌数、その中の生菌数、及び死菌数を定量できることがわかった。この方法をモノクローン抗体で染める方法と組み合わせることで、液体中の特定の病原体数の計測もできることから、培養せずに料中の細菌総数、死菌数、特定病原体数の3種類の計測が同時に実施できることがわかった。しかしレーザー顕微鏡で菌数を測定する場合、50倍から200倍に視野を拡大するため材料中の病原体数は50×10^3/mm^3以上なければ正確な定量が困難であった。従って、この方法を臨床材料に応用するために濃縮方法を組み合わせる工夫を行い、態度を上げる必要があった。

The number of bacteria in this study, the number of bacteria, the number of bacteria, the number of bacteria. 1. To analyze the astigmatism of bacteria, bacteria, astigmatism, microparticles, biological particles, DNA, bacteria, astigmatism, astigmatism and astigmatism. The number of particles is very high. The number of particles is much higher than the number of particles. In the system, the main components of the tube are as follows: the surface of the membrane, the surface of the membrane, the liquid, the surface, the The number of bacteria in the general bacteria count is calculated by the number of bacteria. On the other hand, the number of bacteria in the liquid, the number of bacteria, the number of bacteria in the liquid, the number of bacteria, the number of bacteria, and the number of dead bacteria, the number of bacteria in Methods: the number of specific pathogens in liquid, the number of bacteria in culture materials, the number of dead bacteria and the number of specific pathogens in culture materials were tested in the same time, such as the number of specific pathogens in liquid, the number of specific pathogens in liquid and the number of bacteria in culture materials. The number of pathogens was 50 × 10 ^ 3

项目成果

山本啓之: "Study of nonculturable Legionella pneumophia cells during multiple-nutrient starvation" FEMS Microbiol lett. 20. 149-154 (1996)

Hiroyuki Yamamoto：“多重营养饥饿期间不可培养的肺炎军团菌细胞的研究”FEMS Microbiol lett。 20. 149-154 (1996)