食細胞に持続感染しているサルモネラ及び宿主食細胞の発現遺伝子群の系統解析

持续感染吞噬细胞和宿主吞噬细胞的沙门氏菌表达基因的系统发育分析

• 批准号: 13226033
• 负责人: 江崎 孝行
• 金额: --
• 依托单位: Gifu University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (C)
• 财政年份: 2001
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2001 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-13226033/
• 关键词: サルモネラ; 細胞内寄生; 侵入性; 病原性; マイクロアレイ; チフス菌; mRNA

サルモネラが異なった環境に暴露されたとき、どのように全遺伝子の発現を調節し生き残りのために適応しているかを解析するため、サルモネラの遺伝子チップを作成し網羅的な遺伝子の発現を解析する環境を作成した。大腸菌の全ゲノムとサルモネラ全ゲノムを比較し、サルモネラに特異的な配列を持った遺伝子を約600遺伝子選択しマイクロアレイを作成した。遺伝子は5末端から500-1000塩基をPCRで増幅後、精製しガラスマイクロアレイに固定した。細菌のmRNAの増幅には遣伝子増幅に使用したアンチセンスDNA配列を使い特異的にmRNAをcDNA変換し解析した。通性食細胞内寄生細菌であるチフス菌は人の腸管内に入ると、きょう膜合成遺伝子群viaB領域の発現を抑制し、侵入に必要な侵入性タンパク質を発現する。ところがきょう膜合成遺伝子群viaB領域の遺伝子は食細胞内で発現されており、この発現が食細胞内増殖には不可欠で有ることを報告してきた。このとき変動する遺伝子を解析するためまず、低浸透圧(50mM NaCl)で24時間培養し、vi抗原を発現しているチフス菌を300mMのNaClに移し、15分、30分、60分後に全RNAを抽出しmRNAの変化を解析した。この解析のためにompR, viaB, ompf, ompC, rpoSのノックアウト株を作成し野生株を比較し環境変化に応答する遺伝子群を特定する環境を作成した。

サ ル モ ネ ラ が different な っ た environment に exposed さ れ た と き, ど の よ う に totally survived 伝 の 発 now を adjust し raw き residual り の た め に optimum 応 し て い る か を parsing す る た め, サ ル モ ネ ラ の posthumous son 伝 チ ッ プ を made し な of snare 伝 son の 発 now を parsing す る environment を made し た. Coliform の full ゲ ノ ム と サ ル モ ネ ラ full ゲ ノ ム を し, サ ル モ ネ ラ に specific な match column を hold っ た heritage 伝 son を about 600 legacy 伝 son sentaku し マ イ ク ロ ア レ イ を made し た. The terminal of the 伝 carrier <e:1> 5 is ら ら500-1000. The base is を. After the PCRで is increased, the refined <s:1> ガラス ガラス ガラス ロアレ ロアレ に に に is fixed at に. Bacteria の mRNA の rights of に は sent 伝 child rights of use に し た ア ン チ セ ン ス DNA match column を make い specific に mRNA を cDNA variations in し parsing し た. Connectivity food cells parasitic bacteria で あ る チ フ bacteria ス は people within の insufflate に る と, き ょ う membrane synthesis heritage 伝 subgroup viaB field の 発 を inhibit し now of, or intrusion into, a necessary な に invasive タ ン パ ク qualitative を 発 now す る. と こ ろ が き ょ う membrane synthesis heritage 伝 subgroup viaB field の heritage 伝 son は food cells で 発 now さ れ て お り, こ の 発 が food raised colonization in the cell now に は do not owe で る こ と を report し て き た. こ の と き - move す る posthumous son 伝 を parsing す る た め ま ず, low penetration 圧 (50 mm NaCl) で 24 time cultivating し, vi antigen を 発 now し て い る チ フ の ス bacteria を 300 mm NaCl に moving し, 15, 30, 60 minutes に RNA を pulled out all the し mRNA の variations change を parsing し た. こ の parsing の た め に ompR, viaB, ompf, ompC, rpoS の ノ ッ ク ア ウ ト strains を made し wild strains を に し environment variations are compared 応 answer す る heritage 伝 subgroup を specific す る environment を made し た.

项目成果

江崎孝行, 河村好章: "Vi-Suppressed wild strain Salmonella typhi cultured in high osmolarity is hypernrasive to epithelial cells and destructive of peyers patches"Microbiol. Immunol.. 45. 149-158 (2001)

Takayuki Ezaki、Yoshiaki Kawamura：“在高渗透压下培养的 Vi 抑制野生菌株伤寒沙门氏菌对上皮细胞具有过度刺激作用，并破坏派氏斑”Microbiol.. 45. 149-158 (2001)

江崎孝行, 河村好章: "Construction of rirulent defective mutants of Salmonella typhi and their phenotypic descriptin as candidates for educational parpases"Microhiol. Cult. Coll.. 17. 13-21 (2001)

Takayuki Ezaki、Yoshiaki Kawamura：“伤寒沙门氏菌的致病性缺陷突变体的构建及其作为教育性 parpases 候选者的表型描述”Microhiol.. 17. 13-21 (2001)