花成ホルモン(フロリゲン)の検定法の開発

开花激素（florigen）测定方法的开发

• 批准号: 09878134
• 负责人: 泉井 桂
• 金额: $ 1.22万
• 依托单位: Kyoto University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Exploratory Research
• 财政年份: 1997
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1997 至 1999
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-09878134/
• 关键词: アサガオ; 遺伝子発現; フロリゲン; プロテインキナーゼ; 花芽誘導; 暗処理; cDNA; 茎頂

フロリゲン(花成ホルモン)は存在が予想されながらその実体は不明であり、また花芽誘導の機構も明かでない。本研究はフロリゲンがシグナルレセプター型のプロテインキナーゼ(SRPK)によって花成誘導を行うのではないかという作業仮説のもとに、典型的な短日植物であるアサガオ(Pharbitis nil,strain Violet)を用いて、(1)花成誘導に対するプロテインキナーゼ阻害剤の影響、(2)花芽誘導初期過程で発現する遺伝子の探索(3)SRPK遺伝子の探索を行った。その結果,(1)非選択的プロテインキナーゼ(PK)の阻害剤であるK252Aとスタウロスポリン、ミオシン軽鎖プロテインキナーゼ(MLCK)の選択的阻害剤であるKT5926が極めて低濃度1nM-10nM)で花芽形成を阻害すること、また、PKAとPKCの阻害剤であるH7とHA-1004(IC50=50μM)も花成を阻害した。しかし、PKAの選択的阻害剤であるH-8、PKGの阻害剤のKT5823は花成を阻害しなかった。チロシンキナーゼの阻害剤であるハービマイシンも花芽形成を阻害した。一方、H7とHA-1004は暗処理後投与すると花成を促進するなど花成を促進するなど花成誘導にプロテインキナーゼ(PKG、MLCK)が深く関与していることを示唆する結果を得ている。(2)花芽誘導初期に成長点で発現する遺伝子の探索をデイファレンシャルスクリーニング法で行い、花芽誘導条件下で減少する4個のcDNAクローン(Pn14,21,53,73)を得て、これらの塩基配列と発現様式の解析を行った。塩基配列の解析からPn14,21,53はそれぞれ、ダイズのEarly nodulin#315、トウモロコシのフェレドキシンIII、トリプシンインヒビターとの相同性が高いことがわかった。これらの遺伝子の花成誘導における役割は今後の解析が必要である。(3)植物のRLKのセリン/スレオニンキナーゼドメインによく保存されているアミノ酸配列から設計された縮重プライマーを用いて、アサガオの暗処理終了後30時間経過した茎頂から作成したcDNAライブラリーをPCR法によりスクリーニングした。その結果、セリン/スレオニンキナーゼ全体をコードする部分長のクローンを二つ単離することに成功し、PnR1、PnR2と命名した。ホモロジー探索から、これらふたつのクローンのうちPnR2がRLKである可能性が高いこと判明した。花芽誘導との関連については、現在解析中である。

フ ロ リ ゲ ン (flower into ホ ル モ ン) exist は が to think さ れ な が ら そ の be body は unknown で あ り, ま た flower bud induction の institutions も Ming か で な い. This study は フ ロ リ ゲ ン が シ グ ナ ル レ セ プ タ ー type の プ ロ テ イ ン キ ナ ー ゼ (SRPK) に よ っ て flowers line into induction を う の で は な い か と い う homework 仮 said の も と に, typical な short day plants で あ る ア サ ガ オ (Pharbitis nil, strain Violet) を い て, (1) flowers into induction に す seaborne る プ ロ テ イ ン キ ナ ー ゼ resistance against tonic の effects, (2) the early flower bud induction process で 発 now す る posthumous son 伝 の exploration (3) SRPK heritage 伝 son の exploration line を っ た. そ の results, (1) non sentaku プ ロ テ イ ン キ ナ ー ゼ (PK) の resistance against tonic で あ る K252A と ス タ ウ ロ ス ポ リ ン, ミ オ シ ン 軽 lock プ ロ テ イ ン キ ナ ー ゼ (MLCK) の sentaku's resistance against tonic で あ る KT5926 が extremely め て low concentration 1 nm to 10 nm) で flower bud formation を resistance against す る こ と, ま た, PKA と PKC <s:1> damage inhibitor であるH7とHA-1004(IC50=50μM) <s:1> flower formation を damage inhibitor た た. The <s:1> expert <s:1>, PKA, and PKG respectively choose the 択 pest inhibitor であるH-8, and the <s:1> pest inhibitor <e:1> KT5823. The <s:1> flower cheng を pest inhibitor <s:1> な った った った. Youdaoplaceholder0, キナ, ゼ, ゼ, <s:1>, であるハ, ビ,, シ, シ, シ, <s:1>, flower bud formation を, inhibition of た, た. Side and H7 は dark 処 と HA - 1004 vote after with す る と flowers into を promote す る な ど flowers into を promote す る な ど flowers into induction に プ ロ テ イ ン キ ナ ー ゼ (PKG, MLCK) が deep く masato and し て い る こ と を in stopping す る results て を い る. (2) the early flower bud induction に where で 発 now す る posthumous son 伝 の explore を デ イ フ ァ レ ン シ ャ ル ス ク リ ー ニ ン グ method で い, flower bud induction conditions で reduce す る four の cDNA ク ロ ー ン (Pn14, 21,53,73) を て, こ れ ら の salt base with column と 発 presently others type line analytical を の っ た. Salt base with column の parsing か ら Pn14, 21 does は そ れ ぞ れ, ダ イ ズ の Early nodulin# 315, ト ウ モ ロ コ シ の フ ェ レ ド キ シ ン III, ト リ プ シ ン イ ン ヒ ビ タ ー と の identity が high い こ と が わ か っ た. Youdaoplaceholder6 れら cultural heritage 伝 zi 伝 Hwaseong induced における youge future <s:1> analysis が necessary である. (3) plants の RLK の セ リ ン / ス レ オ ニ ン キ ナ ー ゼ ド メ イ ン に よ く save さ れ て い る ア ミ ノ acid with column か ら design さ れ た shrinkage heavy プ ラ イ マ ー を with い て, ア サ ガ オ の dark 処 reason after the end of 30 time 経 し た stem top か ら made し た cDNA ラ イ ブ ラ リ ー を PCR method に よ り ス ク リ ー ニ ン グ し た. そ の results, セ リ ン / ス レ オ ニ ン キ ナ ー ゼ all を コ ー ド す る part long の ク ロ ー ン を two つ 単 from す る こ と に success し, PnR1, PnR2 と named し た. ホ モ ロ ジ ー explore か ら, こ れ ら ふ た つ の ク ロ ー ン の う ち PnR2 が RLK で あ likely が る い こ と.at し た. Flower bud induction と と is associated with に て て, である in the current analysis.

项目成果

M.Yoshizaki,T.Furumoto,S.Hata M.Shinozaki and K.Izui: "cDNA cloning and expression analysis of a non-photosynthetic ferredoxin gene in morning glory (Pharbitis nil)"Biochem.Biophys.Acta.. (in press). (2000)

M.Yoshizaki、T.Furumoto、S.Hata M.Shinozaki 和 K.Izui：“牵牛花 (Pharbitis nil) 中非光合铁氧还蛋白基因的 cDNA 克隆和表达分析”Biochem.Biophys.Acta..（出版中）

M.Yoshizaki,T.Furumoto,S.Hata M.Shinozaki and K.Izui: "Characterization of a novel gene encoding a phytocyanin-related protein in morning glory (Pharbitis nil)"Biochem.Biophysic.Res.Commun.. 286. 466-470 (2000)

M.Yoshizaki、T.Furumoto、S.Hata M.Shinozaki 和 K.Izui：“牵牛花中编码植物青素相关蛋白的新基因的表征（Pharbitis nil）”Biochem.Biophysical.Res.Commun. 286。