新しい膜融合蛋白の精製および遺伝子クローニング

新型膜融合蛋白的纯化及基因克隆

• 批准号: 09877097
• 负责人: 中村 稔
• 金额: $ 1.28万
• 依托单位: Kyushu University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Exploratory Research
• 财政年份: 1997
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1997 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-09877097/
• 关键词: 膜融合; HTLV-1; CXCケモカイン

我々は既に、HTLV-Iのprinciple neutralizing epitope(PND)をHTLV-Ienvelope protein a.a.187-199の部位に同定し、PNDに対する抗体がHTLV-Iの感染を中和する強い活性があることを示した。一方、HTLV-Iは膜融合によって標的細胞に侵入し、感染細胞は非感染細胞と膜融合することによりSyncytiumを形成すると考えられているがその機構については未だ明らかではない。そこで本研究では、HTLV-Iの膜融合に関するウイルス及び標的細胞の分子を同定し、HTLV-1ウイルスの初期感染機構の解析を目的とした。既に昨年度までの研究において、HTLV-I感染細胞ILT8M2と非感染細胞Molt-4の混合培養により生じるsyncytium細胞をラットに免疫することにより、syncytium形成を著明に増強するモノクローナル抗体(mAbR21)を得た。mAbR21が認識する分子(R21分子)はflowcytometryにより主にT cell及びFibroblast表面に検出され、Immunoblottingではほとんどすべてのcell lineにおいて55kDあるいは36kDaのバンドとして検出された。さらにmAbR21を固相化したアフィニティーカラムを用いてウシ胎児血清から17kDaの蛋白(R21分子)を精製した。その部分アミノ酸シークエンスから、R21分子は今まで報告にない新しいCXCケモカインである可能性が高い。現在、精製R21蛋白やリコンビナントR21蛋白を作製してR21分子の膜融合における作用機構の詳細な解析を進めている。また、ウイルスの侵入を効率よく阻止するHTLV-1gp21(transmembrane peptide)由来のペプチドも同定し、ペプチドによる膜融合阻止機構をgp21蛋白の3次構造の解析に基づき行っている。

HTLV-I principle neutralizing epitope(PND) HTLV-I envelope protein a.a.187-199 at the same site, PND antibody HTLV-I infection neutralizing activity is strong. One side, HTLV-I membrane fusion target cell invasion, infected cells and non-infected cells membrane fusion, formation of Syncytium, examination of the mechanism, not clear The aim of this study is to identify the molecular identity of HTLV-1 and target cells involved in membrane fusion, and to elucidate the mechanism of HTLV-1 initial infection. In the past year, in the mixed culture of HTLV-I infected cells ILT8M2 and non-infected cells Molt-4, syncytium cells were produced, and syncytium formation was significantly enhanced. The mAbR21 recognition molecule (R21 molecule) is detected on the main T cell and fibroblast surface in flowcytometry, and on the cell line in immunoblotting at 55kD and 36kDa. mAbR21 was purified from fetal serum by solid-phase analysis. The possibility of a partial reaction to R21 is high. Now, the purification of R21 protein and the mechanism of membrane fusion of R21 molecule are analyzed in detail. HTLV-1gp21 (transmembrane peptide) is a protein that can prevent the invasion of proteins. The origin of HTLV-1gp21 (transmembrane peptide) is determined based on the analysis of the third order structure of the membrane fusion prevention mechanism.

项目成果

Kenji Yamasaki et.al.: "Long term,high dose interferon-alfa teratment in HAM/TSP." J.Neurol.Science. 147. 135-144 (1997)

Kenji Yamasaki 等人：“HAM/TSP 中的长期、高剂量干扰素-α 治疗。”

Jun-ichi Kira et.al: "Induction of chronic in flammatory arthropathy and mesenchymal tumars in rats in fected with HTLD-I" J.Aqired immune deficiency syndrome and human retrovirology.16. 380-392 (1997)

Jun-ichi Kira 等人：“感染 HTLD-I 的大鼠中慢性炎症性关节病和间质肿瘤的诱导”J.Aqired 免疫缺陷综合征和人类逆转录病毒学。16。