放射線および低酸素刺激による早期応答遺伝子産物の検出に関する研究(がんの遺伝子治療の放射線によるターデッティングを目的として)

辐射和低氧刺激诱导的早期反应基因产物的检测研究（用于癌症基因治疗中的辐射诱导terdetting）

• 批准号: 09877174
• 负责人: 笹井 啓資
• 金额: $ 1.22万
• 依托单位: Kyoto University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Exploratory Research
• 财政年份: 1997
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1997 至 1998
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-09877174/
• 关键词: 低酸素環境; 低酸素応答配列; VEGF遺伝子; エリスロポイエチン遺伝子; 遺伝子治療; 放射線; 低酸素刺激; Fgr-1; エリスロボエチソ遺伝子

本研究では、放射線および腫瘍に特異的な低酸素環境を用いたがん遺伝子治療のターゲッティングを将来の目的として、その準備段階として放射線照射および低酸素刺激に対する応答遺伝子発現の増強を試みた。低酸素応答配列(HRE:Hypoxia Response Element)を含むヒトVEGF(VascularEndothelial Growth Factor)遺伝子の5'非転写領域およびエリスロポイエチン遺伝子の3'非転写領域を取り出して、pGL3に組込んで、レポーター・ベクターを作成した。各プラスミド・ベクターを腫瘍細胞にリン酸カルシウム法で導入した後、6〜12時間の低酸素曝露下での培養を行い、ルシフェラーゼ活性を測定し、低酸素刺激による特異的遺伝子発現を得ることができた。本年度は、さらに特異性を高めるべく、VEGFの3'非転写領域の付加を行い、低酸素応答実験を行った。結果、6時間後の比ルシフェラーゼ活性の低酸素/酸素条件比では、約1.5倍の発現増強を得ることができた。一方、12時間後の測定では、約20%の発現比の低下、比ルシフェラーゼ活性の絶対値の低下も認めた。将来、治療遺伝子を組込む際の選択技の一つとして有用であることが期待される。低酸素応答が一番強く認められたレポーター・ベクターのレポーター遺伝子部分をβガラクトシダーゼ遺伝子に置換して、X-Gal染色実験を行った。HepG2を用いた実験で、低酸素刺激群の特異的な染色が認められた。この結果から、治療遺伝子を組込んだレポーター・ベクターも充分な効果が得ることが期待されるので、治療遺伝子を用いた実験を検討中である。

This study aims to explore the future development of radiation and tumor specific low-acid environments in response to radiation and low-acid stimulation. Hypoxia Response Element (HRE) contains VEGF(Vascular Endothelial Growth Factor) gene in 5'non-coding domain and pGL3 protein in 3' non-coding domain. After introduction, 6 ~ 12 hours of culture under low-acid exposure, the activity of protein was measured, and specific protein expression was obtained under low-acid stimulation. This year, the specificity of VEGF was high, and the 3'non-coding domain was increased, and the acid content was decreased. Results: After 6 hours, the activity of the enzyme was increased by about 1.5 times under the condition of low acid/acid ratio. After 12 hours, the detection ratio is about 20%, and the activity ratio is about 20%. In the future, the treatment of genetic diversity is a matter of choice. Low acid pigment can be used to replace the pigment, X-Gal stain can be used to replace the pigment. HepG2 was identified by specific staining for hypoxanthine stimuli. The results of this study include the following: 1. the treatment of patients with acute respiratory syndrome; 2.

项目成果

Shibamoto,Y., Sasai,K., et al.: "Prognosis of intracranial germinoma with syncytiotrophoblastic giant cells treated by radiation therapy." Int.J.Radiat.Oncol.Biol.phys.37(3). 505-510 (1997)

Shibamoto,Y., Sasai,K., et al.：“放射治疗治疗合体滋养层巨细胞颅内生殖细胞瘤的预后。”

Shibata T、Akiyama N、Noda M、Sasai K、Hiraoka M: "Enhancement of gene expression under hypoxic conditions using fragment of the human vascular endothelial growth factor and the erythropoietin genes."Int.J.Radiat.Oncol.Biol.Phys.. 42(4). 913-916 (1998)

Shibata T、Akiyama N、Noda M、Sasai K、Hiraoka M：“利用人血管内皮生长因子和促红细胞生成素基因片段增强缺氧条件下的基因表达。”Int.J.Radiat.Oncol.Biol.Phys。 42（4）。913-916（1998）。

Nakayama,M., Sasai,K., et al.: "Value of low-dose Gallium-67 imaging in detection of non-Hodgkin's lymphoma recurrence." Radiation Medicine. 15(2). 79-83 (1997)

Nakayama,M.、Sasai,K. 等人：“低剂量镓 67 成像在检测非霍奇金淋巴瘤复发中的价值”。

Nagata,Y., Sasai,K., et al.: "Clinical results of radiofrequency hyperthermia for malignant liver tumors." Int.J.Radiat.Oncol.Biol.Phys.38(2). 359-365 (1997)

Nagata,Y., Sasai,K., et al.：“射频热疗治疗恶性肝肿瘤的临床结果。”

Sasai,K., Murata,R., et al.: "Radiation therapy for ocular choroidal neovascularization (Phase I/II study) Preliminary report" Int.J.Radiat.Oncol.Biol.Phys.39(1). 173-178 (1997)

Sasai,K.、Murata,R. 等人：“眼部脉络膜新生血管的放射治疗（I/II 期研究）初步报告”Int.J.Radiat.Oncol.Biol.Phys.39(1)。