ピロリ菌のホスホリパーゼ〜胃潰瘍・胃癌発症のニュートリガー〜

幽门螺杆菌磷脂酶〜胃溃疡/胃癌的新触发因素〜

• 批准号: 09877437
• 负责人: 杉山 政則
• 金额: $ 1.22万
• 依托单位: Hiroshima University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Exploratory Research
• 财政年份: 1997
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1997 至 1998
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-09877437/
• 关键词: 胃潰瘍; 胃癌; クローニング; 消化酵素; Helicobacter pylori; ホスホリパーゼA2; ホスホリパーゼA_2

研究代表者は、これまで食物の消化酵素として考えられてきた、膵臓でつくられる膵ホスホリパーゼA_2(hPLA_2)が、膵癌細胞の増殖を促進することをごく最近発見したことから、 「胃に棲息するピロリ菌(Helicobacter pylori)が、もしも、ホスホリパーゼA_2を産生しているならば、本酵素が胃潰瘍や胃癌の要因となるかも知れない」という作業仮説を立てた。そこで、本研究では、胃組織検体から分離したピロリ菌のホスホリパーゼA_2活性を調べると共に、本酵素遺伝子のクローニングを目的とした。平成9年度の研究により、ピロリ菌のいくつかの株はホスホリパーゼA_2を産生することを確認したが、その生産量はごく微量であった。そこで、平成10年度は、大腸菌のホスト・ベクター系を用いてピロリ菌の染色体ライブラリーを作製することにした。具体的には、ピロリ菌の染色体DNAをHindIIIで消化後、pUC18に挿入し、Escherichia coli DH5αに導入した。その結果、1500個の形質転換体からなる染色体ライブラリーが作製できた、このライブラリーから任意に10クローンを選び、それぞれプラスミドを分離後、ゲノムの挿入の有無を調査した。その結果、10クローンすべてが0.5〜2.0kbの間でH.pylori染色体DNAのインサーションを持つことを確認した。そこで、これらのクローンがホスホリパーゼA_2活性を発現しているか否か、レシチンの加水分解活性を測定することによりアッセイした。その結果、No.36と命名したクローンが本酵素を産生することを見い出した。今後は、このクローンの有するDNAインサートの塩基配列を解析する。さらに、ホスホリパーゼA_2遺伝子を強力プロモーターの支配下に置くことにより、本酵素の大量産生系を確立すると共に、得られた酵素を用いて胃癌や胃潰瘍との関連性を調査する。

Research representatives は, こ れ ま で food の digestive enzyme と し て exam え ら れ て き た, Cui perforatien で つ く ら れ る Cui ホ ス ホ リ パ ー ゼ A_2 (hPLA_2) が, Cui を promote cancer cell の raised colonization す る こ と を ご 発 く last see し た こ と か ら, "stomach に inhabit す る ピ ロ リ bacteria (Helicobacter Pylori) が, も し も, ホ ス ホ リ パ ー ゼ A_2 を produce し て い る な ら ば, this enzyme が gastric ulcer や の gastric cancer by と な る か も know れ な い "と い う said to homework 仮 を made て た. そ こ で, this study で は, stomach tissue 検 か ら separation し た ピ ロ リ bacteria の ホ ス ホ リ パ ー ゼ A_2 activity を adjustment べ る と に, traces of this enzyme 伝 son の ク ロ ー ニ ン グ を purpose と し た. Pp.47-53 9 year の research に よ り, ピ ロ リ bacteria の い く つ か の strains は ホ ス ホ リ パ ー ゼ A_2 を produce す る こ と を confirm し た が, そ の production は ご く trace で あ っ た. そ こ で, 10 year は pp.47-53, coliform の ホ ス ト · ベ ク タ を ー department with い て ピ ロ リ bacteria の chromosome ラ イ ブ ラ リ ー を cropping す る こ と に し た. After digestion of the specific に た and ピロリ chromosome DNAをHindIIIで, pUC18に is inserted into に, and Escherichia coli DH5αに is introduced into た た. そ の results, 1500 の form quality planning in body か ら な る chromosome ラ イ ブ ラ リ ー が cropping で き た, こ の ラ イ ブ ラ リ ー か ら arbitrary に 10 ク ロ ー ン を び, そ れ ぞ れ プ ラ ス ミ ド を after separation, ゲ ノ ム の scions into の presence of を survey し た. そ の results, 10 ク ロ ー ン す べ て が between 0.5 ~ 2.0 KB の で H.p ylori chromosome DNA の イ ン サ ー シ ョ ン を hold つ こ と を confirm し た. そ こ で, こ れ ら の ク ロ ー ン が ホ ス ホ リ パ ー ゼ A_2 activity を 発 now し て い る か no か, レ シ チ ン の を hydrolytic decomposition activity determination す る こ と に よ り ア ッ セ イ し た. そ の results, No. 36 と named し た ク ロ ー ン が を this enzyme to produce す る こ と を see い out し た. In the future,, <s:1> <s:1> ロ ロ <s:1> <s:1> <s:1> will have するDNA <s:1> サ サ ト ト <s:1> base coordination を analysis する. さ ら に, ホ ス ホ リ パ ー ゼ A_2 posthumous son 伝 を powerful プ ロ モ ー タ ー の domination に buy く こ と に よ り, establishment of the production of large Numbers of enzyme の is を す る と に, too ら れ を た enzyme with い て や gastric ulcer gastric cancer と の masato even sex を survey す る.

项目成果

Ishikawa, Y.: "Oxidative and random cleavage of DNA by the novel iron (II) complex capable of yielding an iron (III) hydroperoxide intermediate" Chem.Lett.39-40 (1998)

Ishikawa, Y.：“能够产生铁 (III) 氢过氧化物中间体的新型铁 (II) 复合物对 DNA 的氧化和随机切割” Chem.Lett.39-40 (1998)

Kumagai,T.: "Crystarization and preliminary X-ray diffraction studies of bleomycin-binding protein from bleomycin-producing Streptomyces verticillus" Acta Cryst.Sec.D. 54. 127-128 (1998)

Kumagai,T.：“产博莱霉素轮枝链霉菌的博来霉素结合蛋白的结晶和初步 X 射线衍射研究”Acta Cryst.Sec.D。

Mizuta, K.: "RIC1.a novel gene required for ribosome synthesis in Saccharomyces cerevisiae" Gene. 187. 171-178 (1997)

Mizuta, K.：“RIC1.酿酒酵母核糖体合成所需的新基因”基因。

Nishimura, M.: "Purification and characterization of a puromycin-hydrolyzing enzyme from blasticidin S-producing Streptomyces morookaensis" J.Biochem.123. 247-252 (1998)

Nishimura, M.：“产杀稻瘟素 S 莫鲁卡链霉菌中嘌呤霉素水解酶的纯化和表征”J.Biochem.123。

Kinoshita,E.: "Activation of MAP kinase cascade induced by pancreatic phospholipase A_2 in human pancreatin cancer line" FEBS Lett.407. 343-346 (1997)

Kinoshita,E.：“人胰酶癌细胞系中胰腺磷脂酶 A_2 诱导的 MAP 激酶级联的激活”FEBS Lett.407。