サーモセンシングタンパク質の立体構造解析と医療への応用
热敏蛋白的三维结构分析及医学应用
基本信息
- 批准号:17659012
- 负责人:
- 金额:$ 1.98万
- 依托单位:
- 依托单位国家:日本
- 项目类别:Grant-in-Aid for Exploratory Research
- 财政年份:2005
- 资助国家:日本
- 起止时间:2005 至 2006
- 项目状态:已结题
- 来源:
- 关键词:
项目摘要
放線菌Streptomyces albusが産生するRheAはリプレッサータンパク質であり,熱を感知してその構造を可逆的に変化させるサーモセンシング機能を有する。本研究では,RheAのサーモセンシング機能を構造生物学的に明らかにするとともに,その機能を医療に役立つ分子スイッチの開発へ応用することを目的としている。昨年度,C末端ヒスチジンタグ付きRheAとその特異的なオペレーターDNAとの複合体の結晶化に成功し,複合体結晶のX線回折実験を行ったが,構造解析に十分な回折強度データは得られなかった。そこで,天然型RheAの大腸菌における発現を行い,各種クロマトグラフィーの手法を用いることにより,その精製系を確立することができた。本年度は,天然型RheAを大量に取得後,その結晶化を行った。シッティングドロップ蒸気拡散法により結晶化を行ったが,数百種を超える結晶化条件を検討したにもかかわらず,結晶は生成しなかった。天然型RheAとオペレーターDNAとの複合体の結晶化も試みたが,結晶は生成しなかった。天然型RheAの精製は困難であり,かつ,結晶も生成しない。そこで,精製の容易なヒスチジンタグ付きRheAへ回帰することにした。ただし,C末端ヒスチジンタグ付きRheAとオペレーターDNAとの複合体の結晶化に成功しているが,その結晶は良質のX線回折データを与えない。RheAのC末端領域はDNA結合部位と考えられることから,C末端ヒスチジンタグが良質結晶の生成を妨げている可能性がある。したがって,N末端ヒスチジンタグ付きRheAを用いることにした。現在,N末端ヒスチジンタグ付きRheAの発現系を構築している。
Streptomycin albus is produced by RheA, and its structure is reversible. The purpose of this study is to investigate the role of RheA in structural biology and its role in medical molecular development. Last year, the crystallization of the complex of DNA and C-terminal protein was successfully carried out. The X-ray reflection of the complex crystal was carried out. The structural analysis was carried out. In this case, natural RheA coliform bacteria can be found in various ways, and the purification system can be established. This year, after obtaining a large amount of natural RheA, the crystallization of RheA was carried out. There are hundreds of crystallization conditions in the process of crystallization, and the crystallization is produced. Crystallization of Natural RheA DNA Complex Natural RheA is difficult to refine, and crystals are generated. It's easy to refine the product. The crystallization of DNA complex was successful, and the X-ray diffraction of good quality was successful. C-terminal DNA binding site of RheA is likely to be affected by the formation of fine crystals. The end of the day, the end of the day, the end of the day. Now, the N-terminal gene transfer system of RheA is constructed.
项目成果
期刊论文数量(5)
专著数量(0)
科研奖励数量(0)
会议论文数量(0)
专利数量(0)
Identification and kinetic study of tyrosinase inhibitors found in sake lees
- DOI:10.1021/jf062315p
- 发表时间:2006-12-27
- 期刊:
- 影响因子:6.1
- 作者:Jeon, Hyung Joon;Noda, Masafumi;Sugiyama, Masanori
- 通讯作者:Sugiyama, Masanori
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- DOI:
- 发表时间:2006
- 期刊:
- 影响因子:0
- 作者:Jovel;S. R.;Yasuyuki Matoba;Motohiro Nishimura
- 通讯作者:Motohiro Nishimura
Crystallographic evidence that the dinuclear copper center of tyrosinase is flexible during catalysis
- DOI:10.1074/jbc.m509785200
- 发表时间:2006-03-31
- 期刊:
- 影响因子:4.8
- 作者:Matoba, Y;Kumagai, T;Sugiyama, M
- 通讯作者:Sugiyama, M
Purification and characterization of the second Streptomyces phospholipase A2 refolded from an inclusion body
- DOI:10.1016/j.pep.2006.05.009
- 发表时间:2006-11-01
- 期刊:
- 影响因子:1.6
- 作者:Jovel, Santa Romero;Kumagai, Takanori;Sugiyama, Masanori
- 通讯作者:Sugiyama, Masanori
The mitomycin C (MMC)-binding protein from MMC-producing microorganisms protects from the lethal effect of bleomycin : crystallographic analysis to elucidate the binding mode of the antibiotic to the protein
来自产生MMC的微生物的丝裂霉素C(MMC)结合蛋白可防止博莱霉素的致死作用:晶体学分析阐明抗生素与蛋白质的结合模式
- DOI:
- 发表时间:2006
- 期刊:
- 影响因子:0
- 作者:Danshiitsoodol;N.
- 通讯作者:N.
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