ソラマメラジカル消去タンパク成分によるカテプシンBと細胞エイジングに関する研究

利用Sorama自由基清除蛋白成分研究组织蛋白酶B与细胞衰老

• 批准号: 09878008
• 负责人: 岡田 悦政
• 金额: $ 0.83万
• 依托单位: Chukyo Junior College
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Exploratory Research
• 财政年份: 1997
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1997 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-09878008/
• 关键词: ソラマメ; ラジカル消去タンパク質; 細胞エイジング; カテプシンB; 培養細胞; 抗酸化酵素

1.長期培養下における実験(1)継代寿命延長効果の確認-ソラマメラジカル消去タンパク成分(WSP)1.25μg/ml、2.5μg/mlを培養細胞TIG-1のPDL20(若齢細胞)と、PDL50(老齢細胞)へ投与した。結果、最終的な継代寿命への延長効果は見られなかった。(2)継代時毎の細胞内抗酸化酵素活性、若齢細胞、老齢細胞に1.25μg/ml WSPを投与しながら継代培養を行い、若齢細胞についてはPDL40(28日目)、PDL50(42日目)を、老齢細胞についてはPDL60(20日目)、PDL70(40日目)の細胞内抗酸化酵素活性を測定した。サイトゾール内スーパーオキシドディスムターゼ(Cu,Zn,SOD)及び、グルタチオンペルオキシターゼ(GSH-Px)活性はコントロールに比べて酵素活性の増加は見られなかった。しかし、カタラーゼ活性については、WSP投与により、コントロールに比べ、実験を行った全ての群において酵素活性の上昇(30〜80%)が見られた。2.カテプシンB活性の測定(1)細胞分裂速度への影響-カテプシンB活性と細胞増殖速度との関連性は本実験に用いたヒト正常2倍体線維芽細胞(TIG-1)においては見られなかった。(2)各継代時-若齢細胞、老齢細胞に1.25μg/ml WSPを投与しながら継代培養を行った、若齢細胞群PDL40(28日目)、PDL50(42日目)、老齢細胞群PDL60(20日目)、PDL70(40日目)のカテプシンB活性を測定した。若齢細胞群PDL40(28日目)においてはカテプシンB活性の上昇は見られなかったが、PDL50(42日目)においては30%程の活性上昇が見られた。(3)老齢細胞期-老齢細胞群PDL60(20日目)、PDL70(40日目)のカテプシンB活性は、WSP投与による酵素活性の上昇は見られなかった。3.今後の研究展開WSPは、スーパーオキシド、II_2O_2を消去するラジカルスカベンジャーであるが、今回WSP投与による細胞内でのカタラーゼ活性の上昇が確認できた。過去の研究から細胞内抗酸化酵素活性は、細胞老化に伴い,SOD、GSH Pxは、不変または、増加傾向にある反面、カタラーゼ活性、及びグルタチオンは減少することが報告されている。故に、カタラーゼ活性を上昇させる結果となったWSP投与群は、細胞老化に対して何らかの影響を及ぼす可能性がある。更に、WSPは細胞増殖(WI-38)を促進させることが分かっているが(昨年度の科学研究費報告)、ガン細胞との関連性が報告されているカテプシンB活性は、正常細胞において、増殖との関係を明らかに出来ず、WSP投与によるカテプシンB活性の上昇も見られなかった。以上の結果をもとに、今後の展開は、WSPの細胞内での作用部位および、増殖因子等他の成分との比較検討、更に、細胞寿命の回数券とされるテロメア、及びテロメラーゼ酵素との関連性の検討を行うことにより、WSPの細胞老化、個体老化への有用性および、フリーラジカルと老化との機構を明らかにして行きたい。

1. Under the long-term culture に お け る be 験 (1) 継 generation life extension services fruit の confirmation - ソ ラ マ メ ラ ジ カ ル elimination タ ン パ ク ingredients (WSP) 1.25 mu g/ml, 2.5 mu g/ml を culture cell TIG - 1 の PDL20 (if 齢 cells) と, PDL50 (old 齢 cells) へ cast with し た. The results, the final な継 generation lifespan へ the effect of へ on the extension of <s:1> can be found in られな った った. (2) At 継 generations, the activity of antioxidant enzymes in each batch of cells, such as 齢 cells and old 齢 cells に1.25μg/ml WSP を cast with し な が ら 継 generation culture を い, if 齢 cell に つ い て は PDL40 (28 eyes), PDL50 を (42 eyes), old 齢 cell に つ い て は PDL60 (20 eyes), PDL70 (40 eyes) の を determination of resistance to acidic enzyme activity in cells し た. サ イ ト ゾ ー ル within ス ー パ ー オ キ シ ド デ ィ ス ム タ ー ゼ (Cu, zinc, SOD) and び, グ ル タ チ オ ン ペ ル オ キ シ タ ー ゼ (gsh-px) activity は コ ン ト ロ ー ル に than べ て の raised and enzyme activity は see ら れ な か っ た. し か し, カ タ ラ ー ゼ active に つ い て は, WSP cast and に よ り, コ ン ト ロ ー ル に than べ, be 験 を line っ た full て の group に お い の て enzyme activity rises (30 ~ 80%) が see ら れ た. 2. カ テ プ シ ン の B activity determination of (1) the speed of cell division へ の - カ テ プ シ ン active と B cells raised colonization rate と の masato even sex は this be 験 に with い た ヒ ト 2 times normal body line (TIG - 1) d bud cells に お い て は see ら れ な か っ た. (2) the 継 generation - if 齢 cells, old 齢 に mu 1.25 g/ml WSP を cast with し な が ら 継 generation raises を line っ PDL40 た, if 齢 cell group (28 eyes), PDL50 (42 eyes), old PDL60 齢 cell populations (20 eyes), PDL70 (40 eyes) の カ テ プ シ ン を B activity determination し た. If PDL40 齢 cell populations (28 eyes) に お い て は カ テ プ シ ン B activity rise の は see ら れ な か っ た が, PDL50 (42 eyes) に お い て は rise 30% cheng の activity が see ら れ た. (3) the old 齢 cells period - PDL60 齢 cell populations (20 eyes), PDL70 (40 eyes) の カ テ プ シ ン B cast with active は, WSP に よ る enzyme activity rise の は see ら れ な か っ た. 3. The future research on WSP の は, ス ー パ ー オ キ シ ド, II_2O_2 を elimination す る ラ ジ カ ル ス カ ベ ン ジ ャ ー で あ る が, today back to WSP cast and に よ る intracellular で の カ タ ラ ー ゼ active の rise が confirm で き た. Past の research か ら intracellular acidification は enzyme activity, cell aging に companion い, SOD, GSH Px は, not - ま た は, rights and tendency に あ る opposite, カ タ ラ ー ゼ activity, and び グ ル タ チ オ ン は reduce す る こ と が report さ れ て い る. So the に, カ タ ラ ー ゼ active を rise さ せ る results と な っ た は cast with WSP group, cell aging に し seaborne て what ら か の influence を and ぼ す possibility が あ る. More に, WSP は cells (WI - 38) rights colonization を promote さ せ る こ と が points か っ て い る が (yesterday) annual fee の scientific research report, ガ ン cells と の masato even sex が report さ れ て い る カ テ プ シ ン active は B, normal cells に お い て, raised colonization と の masato を and Ming ら か に ず, WSP cast with に よ る カ テ プ シ ン rise の も see B activity Youdaoplaceholder0 った. の above results を も と に, future の は and WSP の intracellular で の working part お よ び, raised colonization factor he の composition と の is の 検 please, more に, cell life back to the number of coupons と さ れ る テ ロ メ ア and び テ ロ メ ラ ー ゼ enzyme と の masato even sex の 検 line for を う こ と に よ り, WSP の cell aging, aging へ の usefulness お よ び, フ Aging リ ー ラ ジ カ ル と と の institutions を Ming ら か に し て line き た い.

项目成果

岡田悦政・岡田瑞恵: "Scavenging effect of water soluble proteins in broad beans on free redicals and active oxygen species." Journal of agricultural and Food Chemistry. 46(2). 401-406 (1998)

Etsumasa Okada 和 Mizue Okada：“蚕豆中水溶性蛋白质对游离自由基和活性氧的清除作用”，农业和食品化学杂志 46(2) (1998)。