光周性花芽誘導の日長計機構解明のためのウキクサの形質転換実験系の開発
开发浮萍转化实验系统以阐明光周期花芽诱导的日长机制
基本信息
- 批准号:09874169
- 负责人:
- 金额:$ 1.34万
- 依托单位:
- 依托单位国家:日本
- 项目类别:Grant-in-Aid for Exploratory Research
- 财政年份:1997
- 资助国家:日本
- 起止时间:1997 至 无数据
- 项目状态:已结题
- 来源:
- 关键词:
项目摘要
光周性花芽誘導が詳細に調べられているウキクサLemna gibbaG3とLemna pausicostata6746を使い、形質転換法の開発を試みた。まず、パーティクルガン装置でマーカー遺伝子を導入し形質転換体をスクリーニングした。マーカー遺伝子としてはハイグロマイシンや蛋白合成阻害剤(ビアラフォス)の耐性遺伝子を利用した。遺伝子導入後、形質転換体が分離するまで培養を続け、ハイグロマイシンやビアラフォスで選択した。その結果いくつかの耐性コロニーを得た。これらのコロニーからDNAを抽出し遺伝子の導入をSouthern blotで確認したが、有意なシグナルは得られなかった。そこで、新たに、抗生物質濃度や、遺伝子導入の条件(加速圧、距離、ウキクサの設定など)の条件を検討し、効率の良い条件を検討した。その結果、使用した機械について効率のよい、導入条件を概ね設定することができた。またハイグロマイシンは効果が現れるのに時間がかかりすぎることが判ったがビアラフォスは即効性のある作用を示し、スクリーニングに適していることが確認できた。この結果に基づき、改めて得られたスクリーニングを行い、ビアラフォス耐性コロニーを数個得ることができた。現在このコロニーへの遺伝子導入を確認しているが、ビアラフォス耐性は比較的弱く、ビアラフォスの濃度をあげると耐性を失う。そこで今後はまずプロモーターの改良を試みる予定である。さらにアグロバクテリウムを利用した減圧法によっても遺伝子導入を試みる予定である。これらがうまく行けばマーカー遺伝子とcab遺伝子のプロモーターとルシフェラ-セ遺伝子の融合遺伝子を作製し、これをウキクサへ導入し、生物発光によるウキクサの概日性リズムの測定を試みる。
Photoperiodic flower bud induction is regulated in detail by Lemna gibbaG3 and Lemna pausicostata6746. The device has been modified to include the following elements: The protein synthesis inhibitor (s) and the tolerance gene (s) are utilized in the process of protein synthesis. After the introduction of the gene, the morphological and morphological changes were isolated and cultured, and the selection process was carried out. The result is that the patient has to be patient. Southern blot was used to confirm the presence of DNA. The conditions for the introduction of antibiotics (acceleration, distance, and setting) and the optimal conditions for the efficiency are discussed. The results, the use of machinery, the efficiency, the introduction of conditions, and the setting of conditions. The result is that the time is right, and the judgment is right. The results of this study are as follows: Now, we can confirm that the concentration of the protein is relatively weak, and the tolerance is relatively low. In the future, we will try to improve the situation. The first step is to use the pressure reduction method to introduce the gene into the system. The fusion gene of the gene is controlled, introduced, and tested for biological luminescence.
项目成果
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专著数量(0)
科研奖励数量(0)
会议论文数量(0)
专利数量(0)
Aoki、S.、: "Circadian rhythm of the cyanobacterium Synechocystis sp.PCC 6803 in the dark."J.Bacteriol.. 179. 5751-5755 (1997)
Aoki, S.:“黑暗中蓝藻集胞藻属 PCC 6803 的昼夜节律。J.Bacteriol.. 179. 5751-5755 (1997)
- DOI:
- 发表时间:
- 期刊:
- 影响因子:0
- 作者:
- 通讯作者:
Kondo, T.: "Circadian rhythms in rapidly dividing cyanobacteria" Science. 275. 224-227 (1997)
Kondo, T.:“快速分裂蓝细菌的昼夜节律”科学。
- DOI:
- 发表时间:
- 期刊:
- 影响因子:0
- 作者:
- 通讯作者:
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Takao Kondo:“生物钟的分子机制:蓝细菌的时钟基因”,《科学》第 68 卷,138-143 (1998)。
- DOI:
- 发表时间:
- 期刊:
- 影响因子:0
- 作者:
- 通讯作者:
Kutsuna S.: "A Period-Extender Gene pex that Extends the Period of the Circadian Clock in the Cyanobacterium Synechococcus sp. Strain PCC 7942." J.Bacteriol.in press.(1998)
Kutsuna S.:“一种延长蓝藻聚球藻菌株 PCC 7942 生物钟周期的周期延长基因 pex。”
- DOI:
- 发表时间:
- 期刊:
- 影响因子:0
- 作者:
- 通讯作者:
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S.S.Golden:“蓝藻的昼夜节律。”
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