放線菌の形態分化を制御するホルモン応答性信号伝達系AmfRの作用機構の解析

控制放线菌形态分化的激素响应信号转导系统AmfR作用机制分析

• 批准号: 08760103
• 负责人: 上田 賢志
• 金额: $ 0.64万
• 依托单位: Nihon University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1996
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1996 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-08760103/
• 关键词: A-factor; Streptomyces griseus; aerial myulicem; sporulation; amfR; regulation

amfRはStreptomyces griseusの基底菌糸から気中菌糸への分化の開始を正に制御する遺伝子である。amfRがS.griseusの分化誘導機構のどの段階において機能しているかを調べるために、各種分化欠損変異株を宿主に用いてamfRによる分化誘導回復の有無を検討した。その結果、胞子形成とストレプトマイシン(Sm)生産の両方が欠損したClassIIおよびIII変異株の分化は誘導する一方、胞子形成に特異的なClassIV変異株では誘導がおこらなかったことから、amfRは胞子形成とSm生産の共通の制御段階の下流でかつ、胞子形成に特異的な制御の最も上流で機能していると結論した。次に、amfRの発現調節に関する知見を取得することを目的としてamfRのプロモーター領域の解析を行った。予備実験から、amfRは約1.5kb上流に存在するプロモーターによって転写されると考えている。このプロモーター活性は、培地中への合成A-ファクターの添加によって低下したことから、A-ファクターによる制御を受けていると予想した。A-ファクター依存活性を指標にした切り縮め実験により、その調節に必須の29bpの領域を同定した。また、ゲルシフトアッセイによりこの領域に直接結合する蛋白質をA-ファクター欠損株の菌体破砕液中に同定した。このDNA結合蛋白は合成A-ファクターの存在下で培養した菌体の破砕液中には認められなかったことから、A-ファクターによる制御の下流でamfRの発現を調節している制御蛋白であると予想した。硫安沈殿・DEAE・monoQ・Heparin・ゲル溶出の精製ステップをへてこの蛋白質の完全精製を行い、そのN-末端および内部アミノ酸配列から遺伝子の取得に成功した。これによりこの蛋白質は34kDのHelix-Turn-Helix構造をC-末端側に有する転写調節蛋白であることを明らかとした。

amfR controls the initiation of differentiation of Streptomyces griseus basal cells. The differentiation induction mechanism of amfR is discussed in the following aspects: the function of amfR in the differentiation induction mechanism of S.griseus, the presence or absence of amfR in the differentiation induction mechanism of S.griseus and the host. As a result, there is a lack of differentiation of Class II and III mutants in the production of spores, and induction of specific Class IV mutants in the production of spores. Second, the amfR discovery related to the acquisition of the purpose of the amfR domain analysis For example, amfR is about 1.5kb in length. This is the first time I've ever seen a person who's been in a relationship with a person who's been in a relationship with a person. A-10 In addition, the protein A-12 can be directly bound to the protein A-12 in this field, and the protein A-12 can be directly bound to the protein A-12 in this field The synthesis of DNA binding protein in the presence of A-protein in culture medium and the regulation of the expression of A-protein in the downstream. Complete purification of the protein, N-terminal and internal acid alignment were successfully achieved. This protein has a 34kD Helix-Turn-Helix structure and a C-terminal regulatory protein.