調節蛋白AmfRを介した放線菌の形態分化制御機構の分子レベルでの解析

调控蛋白AmfR介导的放线菌形态分化调控机制的分子水平分析

• 批准号: 09760104
• 负责人: 上田 賢志
• 金额: $ 1.54万
• 依托单位: Nihon University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1998
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1998 至 2000
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-09760104/
• 关键词: Streptomyces griseus; amfR; acrial mycclium; gene disruption; supressor gene; A-factor; Streptomyces grisus; 気中菌糸; 胞子; 二成分制御系; DNA結合蛋白; 遺伝子破壊

2成分制御系の応答因子をコードするamfRはstreptomyces griseusのA-ファクター欠損変異株にプラスミド上で導入することでその気中菌糸形成を回復させることから、この菌の形態分化の開始を正に調節する制御遺伝子であることが予想されていた。今回このamfR遺伝子の破壊株の取得に成功した。方法はamfRのコード領域中にカナマイシン耐性遺伝子を挿入したDNA断片を脱落しやすい性質をもつベクターpKU296にクローン化したプラスミドを用いた相同組み替えによった。その結果取得した4株の破壊株はいずれもYMP-グルコース寒天培地上で完全な気中菌糸欠損の性質を示した。このことはamfRがこの菌の形態分化の開始に必須の役割を果たす正の調節遺伝子であることを示している。次にこの破壊株を宿主に用いて高コピープラスミドを用いてショットガンクローニングを行い、気中菌糸形成能欠損の性質をサプレスする遺伝子の取得を試みた。その結果現在までに良好に気中菌糸形成を回復させる4種のDNA断片の取得に成功した。この方法によって得られる遺伝子の中にはamfRの下流で作用する制御遺伝子が存在する可能が考えられる。取得したDNA断片のうち1種についてその塩基配列の部分配列を決定したところ、GTP結合部位をもつ蛋白質をコードする完全な読みとり枠が存在することが明らかになった。現在気中菌糸回復能を指標にしたサブクローニングによって活性を有する読みとり枠の特定を行っている。

(2) the component system responds to the factor of the amfR system, which is called streptomyces griseus.A-the number of bacteria in the system is not affected by the number of bacteria in the system, and the bacteria are formed in the system, and the morphological differentiation of bacteria is beginning to occur. This time, the amfR son broke the plant and achieved success. Methods in the field of amfR, there is a significant difference in tolerance between DNA fragments and exfoliations. In this way, the same group is used to replace the DNA fragments. The results showed that 4 strains of bacteria were isolated from the ground in cold weather, and the results showed that the bacteria of 4 strains were not completely isolated in the cold weather, and the results showed that the bacteria of 4 strains were not completely isolated in the cold weather, and the results showed that the bacteria of 4 strains were completely isolated in cold weather. At the beginning of the amfR bacteria morphological differentiation system, it is necessary to cut the results in the first place and make sure that the results are correct. The host of the secondary virus breakage strain was used to determine whether the bacteria could be tested in the presence of bacteria or bacteria. The results showed that the formation of bacterial clones in good conditions was successful. The DNA fragments were successfully formed. There is a possibility that there is a possibility that there is a problem in the existence of the "amfR" indecent role in the "method". The DNA fragment was used to determine the size of the array, and the GTP bonding site was used to determine the protein content in the combination part. the results showed that there were significant differences between the two groups. At present, the bacteria in the system can be used to indicate that there is a specific line of activity.

项目成果

Ueda et al.: "Characterization of an A-factor-responsive repressor for amfR essential for onset of aenal mycelium formation in Streptomyces griseus" J.Bacteriol.180. 5085-5093 (1998)

Ueda 等人：“amfR 的 A 因子响应阻遏物的特征，对于灰色链霉菌中菌丝体形成的开始至关重要”J.Bacteriol.180。