ラットインスリン様成長因子I(IGF-I)遺伝子の転写制御機構の解析

大鼠胰岛素样生长因子I（IGF-I）基因转录调控机制分析

• 批准号: 08760125
• 负责人: 竹中 麻子
• 金额: $ 0.58万
• 依托单位: The University of Tokyo
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1996
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1996 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-08760125/
• 关键词: IGF-I; 転写因子; South western法; One Hybrid System

本研究では、体タンパク質代謝において重要なホルモンであるIGF-I遺伝子の転写制御機構を解明する目的で、すでに我々が検出に成功しているラット肝臓の核内因子(A〜J)の遺伝子のクローニングを、South western法およびOne Hybrid Systemの2種の方法を用いて行った。1)South western法 A〜Jの因子の結合配列のオリゴヌクレオチドを5〜12回タンデムに連結し(A^<tan>〜J^<tan>)、単独の場合より核内因子との結合活性が上昇していることを確認した。続いて、このA^<tan>〜J^<tan>の配列をプローブとしてラット肝臓cDNAの発現ライブラリーをスクリーニングし、A^<tan>〜J^<tan>の配列と結合する因子の検索を行った。2)One Hybrid System A^<tan>〜J^<tan>の配列をレポーター遺伝子(ヒスチジン合成酵素およびβ-ガラクトシダーゼ)の上流に連結した後、酵母のゲノムDNAに組み込み、レポーター遺伝子の発現のバックグラウンドが十分に低いことを確認した。この系を用いて、レポーター遺伝子の発現を指標としてエフェクター遺伝子(GAL4)の下流に挿入したラット肝臓cDNAライブラリーをスクリーニングし、A^<tan>〜J^<tan>の配列と結合する因子の検索を行った。現在One Hybrid Systemにより5つのクローンを取得しており、その塩基配列の決定を行っているところである。本研究では、IGF-I遺伝子の5'上流領域と結合してその転写を制御する新規の因子のcDNAが取得できる可能性が高く、IGF-Iの生体における多様な作用を考えるとその重要性は非常に大きい。

In this study, two methods were used to detect IGF-I gene encoding mechanisms, including the Southern Western Method and One Hybrid System. 1)Southern Western method A ~ J factor binding alignment of the five to 12 loop linkage (A^<tan>~ J^<tan>), single case, nuclear factor binding activity increased in the middle of the confirmation. The sequence of A^<tan>~ J^<tan><tan>in the middle of the gene expression system is called the sequence of A^~ J^in the middle of the gene expression system<tan>. 2)One Hybrid System A^<tan>~ J^<tan>'s alignment of the hybrid gene ( This system uses the expression index of the gene in the middle and lower reaches of the gene (GAL4) <tan>to detect the expression of the gene in the middle and lower reaches of the gene<tan>. Now One Hybrid System has 5 options to choose from. In this study, IGF-I gene 5'upstream domain and binding to the gene to control new gene cDNA acquisition possibility is high, IGF-I in vivo multiple role of the study is very important.