ラットインスリン様成長因子I遺伝子3'非翻訳領域の構造・機能の解析

大鼠胰岛素样生长因子I基因3非翻译区结构与功能分析

• 批准号: 05760105
• 负责人: 竹中 麻子
• 金额: $ 0.58万
• 依托单位: The University of Tokyo
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1993
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1993 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-05760105/
• 关键词: Northern blot分析; RNase protection assay; インスリン様成長因子I遺伝子; polyA付加シグナル

IGF-I遺伝子の転写は、5'上流領域のエクソン1あるいはエクソン2に存在するいずれかの転写開始点を利用する、3'下流領域のエクソン6に点在する異なるpolyA付加シグナルを選択的に利用するなど様々に制御され、複数種のmRNAが生成することが知られている。本研究では、従来のNorthern blot分析に加え、感度および定量性の優れたRNase protection assayを用いて、タンパク質栄養条件に応答したIGF-ImRNA生成機構を詳細に検討することを目的とした。まず、3'下流領域のpolyA付加シグナルの利用状態を詳細に追跡するため、IGF-I coding regionを含むcDNAおよび最初のpolyA付加シグナル直後の3'下流領域の塩基配列を持つオリゴヌクレオチドをプローブとして、ラット肝臓のRNAを用いてNorthern blot分析を行なった。その結果、cDNAを用いた場合には、0.8-1.2kbのbroadなバンドおよび2.0,3.6,4.0,7.4kbの複数種の転写産物が観察されたが、オリゴヌクレオチドを用いた場合には、0.8-1.2kbのバンドのみが検出されなかった。この結果は、0.8-1.2kbのIGF-mRNAは最初のpolyA付加シグナルを利用して生成し、したがって主にIGF-ImRNAの長さは3'非翻訳領域の長さにより決まっていることを示している。続いて、タンパク質栄養条件の異なるラット肝臓におけるIGF-ImRNA量をNorthern blot分析により測定したところ、タンパク質栄養状態の悪化により特に7.4kbのIGF-ImRNAの減少が著しいことが明らかとなった。我々の他の結果も併せると、タンパク質栄養状態は主に長いIGF-ImRNAの安定性に大きく影響していると考えられた。さらに、エクソン6に10箇所程度存在するpolyA付加シグナルをそれぞれ含むcDNA断片をPCRにより調製することに成功したので、現在、RNase protection assayによる定量的な解析を行なっている。

IGF-I 伝子の転WRITINGは、5' UPPER FIELD のエクソン1あるいはエクソン2にExistenceするいずれかの転write starting pointをutilizationする、3'indecent domainのエクソン6にPoint is used in するdifferentなるpolyA plus シグナルをselect択するなど様々にcontrolされ, plural kinds of のmRNAがGenerationすることが知られている. This study is based on Northern blot analysis, sensitivity and quantitative analysis, and RNase protection. The assay was carried out using quality and culture conditions, and the IGF-ImRNA production mechanism was detailed and the purpose was determined.まず, 3' indecent domain のpolyA pay plus シグナルの use status を details に Trace するため, IGF-I coding regionをcontains むcDNAおよびInitial のpolyA plus シグナルstraight back 3' downstream area の塩base match List of をholding つオリゴヌクレオチドをプローブとして, ラットgangyunnaのRNAを用いてNorthern Blot analysis is performed by なった.その results, cDNA を use いた occasion には, 0.8-1.2kb のbroadなバンドおよび2.0,3.6,4.0,7.4kbのPlural kinds of の転WRITTEN products が観看されたが, オリゴヌクレオチドを用いたOccasion には、0.8-1.2kbのバンドのみが検出されなかった.このRESULTは, 0.8-1.2kbのIGF-mRNAはInitially polyA plus シグナルを was generated using して,したがって主にIGF-ImRNAの长さは3'non-translated domain の长さによりdetermine まっていることをshow している.続いて, タンパクquality and culture conditionsのdifferentなるラット liver芓におけるIGF-ImRNA quantityをNorthern Blot analysis is used to determine the quality and nutritional status of the human body.に7.4kbのIGF-ImRNAのREDUCEDが出しいことが明らかとなった. I'm the result of it and it's the result of it, and it's the quality and status of it, the main one, and the stability of IGF-ImRNA, it's the big impact, and it's the test.さらに、エクソン6に10箇所 Degree ExistenceするpolyA PayplusシグナルをそれぞれContaining cDNA fragments, PCR modulation has been successful, now, RNase protection assayによるquantitative analysisを行なっている.