栄養状態に応答したインスリン様成長因子ImRNAの安定性調節機構の解析

胰岛素样生长因子ImRNA响应营养状态的稳定调节机制分析

• 批准号: 07760131
• 负责人: 竹中 麻子
• 金额: $ 0.64万
• 依托单位: The University of Tokyo
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1995
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1995 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-07760131/
• 关键词: タンパク質栄養; IGF-I; mRNA stability

インスリン様成長因子I (IGF-I)は、体タンパク質の代謝制御において中心的役割を果たしていると考えられているホルモンであり、その生合成量や血中濃度は、タンパク質栄養状態に応答して変化する。現在までに、我々は、タンパク質栄養状態の悪化に伴って肝臓におけるIGF-ImRNAの安定性が低下し、IGF-Iの生合成量が減少、その結果血中IGF-I濃度が低下するという制御機構の存在を強く示唆する一連の結果を示してきた。本研究では、タンパク質栄養状態の低下に伴ってIGF-ImRNAの分解活性が上昇するメカニズムを解明することを目的として、まずIGF-ImRNAの安定性制御領域の同定を試みた。ラット肝臓よりpolyA RNAを調製し、Reticulocyteを用いたin vitro translationの系に加えた際の分解の様子を、Northern blottingにより解析した。その結果、長い3'untranslated region (UTR)をもつ約7.5kbのmRNAが特異的に分解され、この領域がIGF-ImRNAの安定性を制御していることが示された。さらに狭い領域の同定を行うため、IGF-IcDNAの3'UTRをいくつかの断片に分けてクローニングし、mRNAが比較的安定であることが知られているβ-globinのcDNAの下流に連結したプラスミドを構築した。SP6 promoterによりこのキメラmRNAをin vitroで合成し、先と同様にin vitro translationの系で分解の様子を検討中である。今回新たに開発した無細胞系でのmRNA安定性の検討法は過去にほとんど報告がないが、mRNAの構造とその安定性の関連を検討する上で非常に有用であることを示す結果を得ている。

IGF-I is a growth factor that affects the metabolic control of body mass and its central function. Now, the stability of IGF-I mRNA is reduced, the amount of IGF-I produced is reduced, and the concentration of IGF-I in blood is reduced. The existence of regulatory mechanisms is a strong indication of the results. This study aims to clarify the relationship between IGF-I mRNA degradation activity and the decrease in protein homeostasis, and to demonstrate the stability of IGF-I mRNA in the regulatory domain. PolyA RNA modulation, Reticulyte use in vitro translation and analysis As a result, the length of the 3'untranslated region (UTR) is about 7.5 kb, and the mRNA is specifically decomposed. The stability of IGF-I mRNA is controlled by this region. In addition, IGF-I cDNA fragments were isolated from the 3'UTR of the narrow domain, and mRNA was relatively stable. The downstream links of β-globin cDNA were constructed. SP6 promoter mRNA in vitro synthesis, in vitro translation and in vitro decomposition The new method developed this time to analyze mRNA stability in cell-free lines is more useful than previous reports and to analyze the relationship between mRNA structure and mRNA stability. This shows the results.