雄性生殖細胞分化過程における分子シャペロンを介したタンパク質輸送の研究

雄性生殖细胞分化过程中分子伴侣介导的蛋白质转运研究

• 批准号: 08760278
• 负责人: 大迫 誠一郎
• 金额: $ 0.7万
• 依托单位: Kagoshima University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1996
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1996 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-08760278/
• 关键词: カルネキシン; マグネシウム; 精子発生; 精細胞; 抗体

本研究は,精細胞内でCalnexin-1に結合しているタンパクを同定し,そのcDNAのクローニングを行い,ならびにCalnexin-1との結合調整機構を検討,Calnexin-1の小胞体タンパク輸送への関わりを明らかにすることが目的であった。実験目的を簡単に遂行できる系として、申請書(1)Calnexin-1結合タンパクの分離,および(2)Calnexin-1と結合タンパクとの結合様式の検討を同時に行うため,今回はクロスリンカーは用いず精巣をCa2+EGTA,Mg2+,EDTA存在下で別々にホモジナイズし,2種類の抗Calnexin-1抗体(Polyclonalおよび小胞体内腟domainを認識するMonoclonal抗体)カラムによるAffinity chromatographyにより結合複合体回収状況の比較を行った.その結果,Polyclonal抗体カラムでは,上記4条件すべてにおいてCalnexin-1以外の夾雑タンパクが確認できたが,特にEDTA存在下で他の条件で見られない多くのバンドを確認した.回収されるCalnexin-1複合体の総量もこの条件がもっとも多かった.これに対し,Monoclonal抗体カラムでは,EDTA存在条件でのCalnexin-1回収率は他の条件より低く,また他条件ではCalnexin-1以外の夾雑タンパクはほとんど観察されなかった.このMonoclonal抗体はCalnexin-1の内部Porlin-rich repeat配列を認識し,この部位に小胞体タンパクが結合すると予想される.従って上記の結果は,Mg2+のような2価イオン非存在下で,Calnexin-1は他のタンパクと優位に相互作用する可能性を示している.これは体細胞Calnexinで報告された(Ou et al.,1995J Biol Chem 270:18051)Mg2+による構造変化による機構と類似していると推測された.なお,本学において組み換え技術を行使するには予想に反しあまりにも設備的不十分さがあったため,本年度は周辺機器のセットアップを行うにとどまり、(1)-2)Two-Hybridシステムを用いたCalnexin-1結合タンパクcDNAの検出,(3)結合タンパクcDNAとCalnexin-1 cDNAを培養細胞に導入したモデルの確立,は実験行使に至らなかった。

In this study, the binding mechanism of Calnexin-1 in sperm cells was investigated, and the binding mechanism of Calnexin-1 in sperm cells was discussed. The application (1)Calnexin-1 and Calnexin-1 were separated, and (2)Calnexin-1 and Calnexin-1 and Calnexin-1 were separated and discussed simultaneously, and now Calnexin-1 and Calnexin-1 were separated and discussed in the presence of Ca2 +EGTA, Mg2 +,EDTA. A comparison of 2 types of anti-Calnexin-1 antibodies (Polyclonal and Monoclonal antibodies) in Affinity chromatography. As a result,Polyclonal antibodies were identified under the four conditions listed above except for Calnexin-1, especially in the presence of EDTA. Calnexin-1 complex is a complex of complex molecules. In this case,Monoclonal antibodies are found in the presence of EDTA, and Calnexin-1 is found in the presence of EDTA, and Calnexin-1 is found in the presence of EDTA. The Monoclonal antibody recognizes the internal Porlin-rich repeat alignment of Calnexin-1, and it is expected to bind to this site. The above results show that in the absence of Mg2 +,Calnexin-1 has the potential to interact with other elements in a preferential manner. Calnexin is reported by Ou et al., 1995J Biol Chem 270:18051) Mg2 +-induced structural transformation, mechanism and analogy. However, due to the lack of equipment when using the combination technology in this school, this year we will be using the local machine,(1)-2) the detection of Calnexin-1 combined with Tappa cDNA in the Two-Hybrid system, and (3) the establishment of a module for introduction into cultured cells combined with Tappa cDNA and Calnexin-1 cDNA, which has been implemented until now.

项目成果

大迫誠一郎: "精細胞特異的発現遺伝子の解析" 日本産婦人科学会鹿児島地方部会雑誌. 第4巻. 36-41 (1996)

大迫诚一郎：“精子细胞特异性表达基因的分析”日本妇产科学会鹿儿岛分会杂志第4卷36-41（1996年）。