哺乳類雄性生殖細胞の温度感受性に関する分子生物学的解析
哺乳动物雄性生殖细胞温度敏感性的分子生物学分析
基本信息
- 批准号:09760273
- 负责人:
- 金额:$ 1.41万
- 依托单位:
- 依托单位国家:日本
- 项目类别:Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
- 财政年份:1997
- 资助国家:日本
- 起止时间:1997 至 1998
- 项目状态:已结题
- 来源:
- 关键词:
项目摘要
申請者は高分子量型の熱ショック蛋白の一種HSP90が,減数分裂前精細胞に高発現しているが,減数分裂後では減弱することを報告した(Ohsako et al.,J HistochemCytochem,1995,67-76)。HSP90は近年転写因子特異的分子シャペロンとして注目されており,このシャペロンの充分量の発現がないと,ある種の転写因子が機能しないことが示されている.減数分裂後の精細胞では高温暴露でコンフォーメーション変化をうけた分化関連転写因子が,このシャペロン機能により再賦活化されないまま放置される可能性がある.そこで本研究ではHSP90が精細胞特異遺伝子の発現調整にどのように関与しているか検討するため,独自の無細胞 in vitro転写系を確立することをスタートポイントとし,この系における転写効率のHSP90による影響を観察し,さらにHSP90に相互作用して精巣内遺伝子の転写に関与する因子をクローニングすることを試みた.本年度は前年度完了すべき予備的実験を,再度行い,In vivo高温暴露によってHSP90の発現に変化があるか検討した。少なくとも非放射線系では37℃,43℃ともにマウス精巣では発現パターンに変化は見られなかった。現在[35S]Met投与によるラベル実験を行っているが,芳しいデータは得られていない。原因の一つに精巣の温度シフトによるタンパク分解がかなり短時間に起こることが考えられる.また,無細胞in vitro転写系に関しては,mouse calnexin-t遺伝子,mouseprotamine-2遺伝子の調節領域を,pBluescriptに繋いだベクターを用い,runoff assayを試みようとしたが,核抽出液の調整法に問題を残したまま現在に至っている.
The applicant reported that HSP90, a high molecular weight protein, was highly expressed in sperm cells before meiosis and weakened after meiosis (Ohsako et al., J HistochemCytochem,1995,67-76)。HSP90 is a novel gene that has been identified as a gene specific molecule in recent years. After meiosis, sperm cells are exposed to high temperature, and the differentiation related factors are reactivated. In this study, we established a cell-free in vitro transcription system in which HSP90 regulates the expression of sperm cell specific genes, and investigated the effects of HSP 90 on transcription efficiency and HSP90 interaction on sperm cell specific gene expression. This year, we have completed the preparatory work for the previous year, and we have conducted a review of the development of HSP90 In vivo. The temperature of the non-radioactive system is 37℃, 43 ℃, and the temperature of the non-radioactive system is 37 ℃. Now [35S]Met cast and cast in the middle of the night, and the middle of the night. The reason for this is that the temperature of the fine oil is very high, and the temperature of the fine oil is very high. In this case, cell-free in vitro transcription system is related to mouse calnexin-t gene, mouseproteamine-2 gene regulatory domain,pBluescript,runoff assay, nuclear extract regulation method.
项目成果
期刊论文数量(2)
专著数量(0)
科研奖励数量(0)
会议论文数量(0)
专利数量(0)
Seiichiroh Ohsako, et al.: "Characterization of domaing in Mice of asluexin-t, a putatire molecular chaperene required in sperm fertility, with use of glutathione S-transferase-fusion protains." Biology of Reproduction. 59. 1214-1223 (1998)
Seiichiroh Ohsako 等人:“使用谷胱甘肽 S-转移酶融合蛋白,对小鼠中 asluexin-t 的结构域进行表征,asluexin-t 是精子生育所需的一种常见分子伴侣。”
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