イネのグルタミン酸合成酵素群の窒素代謝における役割の解明

阐明水稻谷氨酸合酶组在氮代谢中的作用

基本信息

批准号：
08760053
负责人：
早川俊彦
金额：
$ 0.64万
依托单位：
Tohoku University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
财政年份：
1996
资助国家：
日本
起止时间：
1996 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-08760053/
关键词：
アンモニアイネ窒素転流 NADH依存性グルタミン酸合成酵素

项目摘要

1.イネNADH依存性グルタミン酸合成酵素(NADH-GOGAT)遺伝子の単離イネNADH-GOGAT遺伝子のプロモーター領域を含む全構造遺伝子を相補し得るイネゲノムクローン群を単離し、これらの塩基配列を決定した。その結果6.5KbpのイネNADH-GOGAT遺伝子の推定翻訳領域はアルファルファNADH-GOGAT遺伝子の翻訳領域と推定アミノ酸配列レベルで高い相同性を示した。10.5Kbpの推定転写領域は、21個のイントロンで分断された22個のエキソンから構成されていた。推定プロモーター領域には,GCN4モチーフやGT3ボックスが存在した。2.アンモニア処理したイネ幼植物根のNADH-GOGAT転写産物含量の解析アンモニア処理したイネ幼植物根では、NADH-GOGATmRNA含量は極めて短時間で急激に増加し、処理後6時間目には最大となった。このNADH-GOGATmRNAの増加蓄積は、タンパク質合成阻害剤のシクロヘキシミドの添加処理では阻害されなかったが、グルタミン合成酵素の阻害剤であるメチオニンサルフォキシミンの添加処理により完全に阻害された。3.アンチセンスNADH-GOGATcDNAを導入した形質転換イネの作出現在、約0.8Kbpのイネ根NADH-GOGATcDNA断片を、35SプロモーターとNOSタ-ミネーターの間にアンチセンス方向に繋いだバイナリーベクターを構築している。4.イネNADH-GOGAT完全鎖長cDNAクローンの単離現在、NADH-GOGATmRNA含量の高いイネ未抽出葉身とアンモニア処理したイネ幼植物根から、調製したpoly (A)^+RNAを用いて、cDNAライブラリーを構築している。

1。分离水稻NADH依赖性谷氨酸合酶（NADH-GOGAT）基因的分离一组水稻基因组克隆，能够互补所有结构基因，包括水稻NADH-GOGAT基因的启动子区域并确定其碱基序列。结果表明，6.5 kbp的水稻NADH-GOGAT基因的假定翻译区域在推定的氨基酸序列水平上表现出较高的同源性，该氨基酸序列与苜蓿NADH-GOGAT基因的翻译区域。 10.5 kbp假定的转录区域由22个外显子组成，除以21个内含子。推定的启动子区域包含GCN4图案和GT3框。 2。分析经氨处理的水稻幼苗根中的NADH-GOGAT转录本含量在经过氨处理的水稻幼苗根中，NADH-GOGAT mRNA含量在很短的时间内急剧增加，在治疗后达到了最大的第六小时。添加蛋白质合成抑制剂环己酰亚胺的抑制，NADH-GOGAT mRNA的积累增加了，而是通过添加甲硫氨酸磺胺硫胺（甲他氨酸硫胺（谷氨酰胺合酶的抑制剂）完全抑制。 3。目前，我们已经构建了一个二进制矢量，该二进制向量将大约0.8 kbp的水稻根NADH-GOGAT cDNA片段与35S启动子和NOS泰氨酰taminator之间的反义方向联系起来。 4。当前，使用poly（a）^+RNA构建cDNA库的米nadh-gogat全链长度cDNA克隆，该cDNA库是用poly（a）^+RNA构建的，它是从没有提取的含有高NADH-GOGAT mRNA含量和氨处理的水稻幼苗根的米叶片制备的。