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イネ植物体内における利用可能な窒素の情報検知機構と情報伝達経路の解明

水稻速效氮信息检测机制及信息传递途径阐明

基本信息

批准号：
17658033
负责人：
早川俊彦
金额：
$ 2.24万
依托单位：
Tohoku University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Exploratory Research
财政年份：
2005
资助国家：
日本
起止时间：
2005 至 2006
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-17658033/
关键词：
植物遺伝子シグナル伝達栄養学バイオテクノロジー

项目摘要

OsACR群のアミノ酸結合特性解析による窒素シグナル選択性の検証大腸菌内発現組換えOsACR3(rACR3)を用いてグルタミン(Gln)-アガロース結合実験の再検証を行った。また、rACR3の大腸菌内大量発現・精製系を構築し、非固定条件下でのGlnとrACR3の結合特性を超高感度等温滴定カロリメーターを用いて解析した。その結果、GlnとrACR3の結合に起因すると予想される熱量変化を観測した。イネにおけるOsACR群の器官・組織・細胞内発現存在場所の同定OsACR2、OsACR5、OsACR7の各タンパク質について、合成ペプチド抗体を作成した。OsACR2タンパク質は、イネの葉鞘の可溶性タンパク質画分に主に存在した。イネ培養細胞での各OsACR-緑色蛍光タンパク質(GFP)融合タンパク質の一過的発現解析から、OsACR2とOsACR5が主に核に存在することが示唆された。OsACR群の相互作用因子の探索と情報伝達経路の同定及び分子機構の解析酵母Two-Hybridスクリーニング法によりOsACR3の相互作用因子候補として単離した分子シャペロン(HSP18.0-CII)が、イネ培養細胞でのGFPとの融合タンパク質の一過的発現解析からサイトゾルと核に存在することが示唆された。また、免疫共沈降解析結果から、OsACR3とHSP18.0-CIIがイネ細胞内のin vivoで相互作用することが確認された。RNAi法によるOsACR群の遺伝子発現抑制イネの作出と情報伝達機能解析RNAi法によりOsACR3の遺伝子発現を抑制した(ノックダウン)イネ当代群の葉身では、窒素転流系の鍵酵素サイトゾル型グルタミン合成酵素1;1の遺伝子(OsGS1;1)の発現が抑制された。同自殖後代について、OsGS1;1発現、生育ならびにアミノ酸含量の変化や穂の表現形変化を調査した。

Analysis of the acid binding characteristics of OsACR group asphyxiating acid. The tissue isolated OsACR3 (rACR3) was detected by the combination of molecular weight (Gln) and antifungal acid binding assay (PCR). A large number of spermatozoa were detected in rACR3 and rACR3 strains, and the combination characteristics of Gln rACR3 under non-fixed conditions were analyzed by isothermal titration with ultra high sensitivity. According to the results, Gln rACR3 and the cause of the disease, you would like to make a quantitative analysis of the disease. The organ tissue of OsACR group has the same location as OsACR2, OsACR5 and OsACR7, and synthesizes the antibody of OsACR to form the antibody. OsACR2, please do not know if there is a difference between the two. In order to improve the quality of the OsACR-, the color distribution system (GFP) is integrated with the analysis of the data, and the main core of the OsACR2 OsACR5 system indicates that there is an error. OsACR group interaction factor analysis and molecular analysis of yeast Two-Hybrid gene interaction factor detection and molecular analysis of OsACR3 interaction factor waiting for isolation of molecular molecular fusion gene (HSP18.0-CII), cell culture and detection of the presence of DNA in the nuclei have been demonstrated. The results of immunoprecipitation and immuno-co-sedimentation analysis showed that OsACR3HSP18.0-CII cells showed intracellular in vivo interaction, which was confirmed by immunoassay. The method of RNAi was used to detect the inhibitory effect of OsACR cluster gene on the detection of OsACR3 agglutinin. The RNAi method was used to analyze the effect of OsACR3 cluster on the inhibition of human body, asphyxiate, asphyxiation, enzyme synthesis, enzyme synthesis. In the same way as the later generations of self-breeding, OsGS1;1 shows that the content of acid in the progeny is similar to that in the later generations of self-breeding.