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マラリア原虫の新規アルテミシニン強耐性株の解析と耐性遺伝子の同定

新型青蒿素耐药疟原虫菌株分析及耐药基因鉴定

基本信息

批准号：
22KJ1203
负责人：
窪田理恵
金额：
$ 1.47万
依托单位：
Tokyo Medical and Dental University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for JSPS Fellows
财政年份：
2023
资助国家：
日本
起止时间：
2023-03-08 至 2024-03-31
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-22KJ1203/
关键词：
熱帯熱マラリア原虫アルテミシニン薬剤耐性

项目摘要

本研究は、既知のアルテミシン遺伝子 (Kelch13)変異をもたない、アルテミシニンに強い耐性を示す原虫（アルテミシニン強耐性株）の新規アルテミシニン耐性遺伝子の同定し、薬剤耐性原虫対策に貢献することを目的とする。本年度、アルテミシニン強耐性株の性状解析を行った。強耐性株はアルテミシニンだけではなく、パートナードラッグにも耐性を示し、多剤耐性原虫であることを明らかとなった。この原虫のアルテミシニン耐性を示す発育期はKelch13変異をもつ耐性株と同じ発育期であったが、この原虫にKelch13変異を導入したところ、アルテミシニンの耐性が増強されなかったことから、強耐性株のアルテミシニン耐性機構はKelch13変異由来耐性機構とは異なる可能性が示唆された。加えて、強耐性株とアルテミシニン感受性株およびKelch13変異アルテミシニン耐性株の全ゲノム塩基配列を同定しSNPs解析や、発育期ごとのトランスクリプトーム解析を進めている。マラリア原虫人工染色体によるゲノムDNAスクリーニングを用いて新規薬剤耐性遺伝子同定するために、制限酵素による限定分解したDNA断片を人工染色体プラスミドに組み込んだゲノムDNAライブラリー構築を進めている。これまでに、ゲノムDNAライブラリーを原虫に遺伝子導入することで、どのくらい多種なインサートDNA配列をもつ原虫集団を一度の実験で作成できるか(DNA被覆率)を、長鎖DNA配列解析が可能なナノポアシークエンサーを用いることで算出することができたため、必要遺伝子導入数が判明した。今後は遺伝子導入を繰り返し行い、インサートDNA配列が強耐性株全ゲノムを被覆する原虫集団を作出し、アルテミシニンによる薬剤選択し、新規アルテミシニン候補遺伝子の同定を進める。

This study aims to identify and identify new resistant strains of Kelch13, a known resistant strain, and to contribute to the development of resistant protozoa strategies. This year, the analysis of characters of resistant plants was carried out. Strong tolerance strains are resistant to disease, but resistant to disease, and resistant to disease. The development period of this parasite is different from that of the resistant strain. The development period of this parasite is different from that of the resistant strain. The resistance of this parasite is different from that of the resistant strain. The resistance of this parasite is different from that of this parasite. The resistance of this parasite is different from that of this parasite. The analysis of SNPs and the analysis of growth period of resistant strains were carried out. The DNA fragments of the artificial chromosome are divided into two groups: the first group is composed of DNA fragments, the second group is composed of DNA fragments, and the third group is composed of DNA fragments. DNA sequence analysis of long locks is possible to determine the number of necessary gene introductions. In the future, we will continue to improve the identification of candidate genes for gene introduction, gene alignment, and gene selection in the host population.