大脳皮質の局所神経回路網を形態学的に解析する

大脑皮层局部神经网络的形态学分析

• 批准号: 08680816
• 负责人: 金子 武嗣
• 金额: $ 1.47万
• 依托单位: Kyoto University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• 财政年份: 1996
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1996 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-08680816/
• 关键词: 大脳皮質; 局所回路; グルタミン酸作動性; GABA作動性; 皮質視床ニューロン; 赤外光ノマルスキー微分干渉顕微鏡; ラット

1)大脳皮質内で行なわれる情報処理過程を理解するために、皮質の局所神経回路の構成原則を明らかにしたい。まず、Tetramethylrhodamine-Dextran amine(TMR-DA)の逆行性取込みにより大脳皮質VI層の出力ニューロンを標識したラット脳スライスを用意する(T.Kaneko et al.,J.Neurosci.Methods,65:157-165,1996)。微小電極を用いて細胞内記録を取り、Biocytinを細胞内注入する。大脳皮質スライスを固定後,Glutaminase,Parvalbu-minとCalbindinに対する抗体と三重蛍光法を用いて、記録された細胞がグルタミン酸作動性の興奮性ニューロンであるかGABA作動性の抑制性ニューロンであるかを判定する。細胞内記録されたニューロンをさらに青黒色に染色し、特に神経軸索の分布に注目する。一方、逆行性に標識された大脳皮質出力ニューロンを抗TMR抗体を用いてGolgi染色様に赤く染色する。このようにして細胞内染色されたニューロンの皮質内軸索側枝が皮質視床投射ニューロンにどの様に入力するか検討した。IV-VI層の錐体細胞からの入力に比べて、II/III層の錐体細胞からの入力は少なかった。2)赤外光ノマルスキー微分干渉顕微鏡を用いたガラス微小電極の細胞内刺入法を開発している。775nm前後の赤外光を用いてスタートしたが、現在、赤外光専用のPolarizer/Analyzerを用いることと900nm前後の赤外光を使用することで100ないし200μmの深い部位のノマルスキー像を改良できた。さらに、1100nm前後の赤外光を試みるべく、新たな赤外フィルターと赤外光用ヴィデオカメラを適用する予定である。したがって、現在のところ実際の実験段階ではなく技術的な開発段階にある。

1)The principles for understanding the information processing process in the cortex and the composition of the cortical neural circuits are clearly stated. A study of the retrograde orientation of Tetramethylrhodamine-Dextran amine(TMR-DA) in the cortex of the brain (T.Kaneko et al., J.Neurosci.Methods,65:157-165,1996)。Microelectrodes are used for intracellular recording and injection of Biocytin. After immobilization of GABA,Glutaminase,Parvalbu-min and Calbindin antibodies were used to record the excitability and inhibition of GABA activity in the cells. Intracellular records show that the distribution of neurons in the brain is affected by the presence of a black stain. One side, retrograde marker, large cortical output, anti-TMR antibody, Golgi stain, red stain. The cortical axons of the cells were stained and the cortical axons of the cells were stained. The pyramidal cells in layers IV-VI are more powerful than those in layers II/III. 2)Development of Intracellular Penetration Method for Microscopic Microscopy with Microelectrodes 775nm before and after the use of infrared light, the use of Polarizer/Analyzer, infrared light before and after 900nm, the use of infrared light before and after 100 nm to 200μm deep part of the image improvement. For example, the red light test before and after 1100nm, the new red light test before and after 1100nm, the new red light test before and after 1100nm, the new red light test before and after 1100nm, the new red light test before and after 1100 nm, and the new red light test before and after 1100 nm. At this stage of development, technology is not available.

项目成果

T.Kaneko et al.: "Improved retrograde axonal transport and subsequent visualization of fetrancethyl-phodamive(TMR)-dextran amine by means of an acidic injection vehicle and antibodies agaiust TMR" J.Neurosci.Methods. 65巻. 157-165 (1996)

T. Kaneko 等人：“通过酸性注射载体和抗 TMR 抗体改善逆行轴突运输和随后的可视化”J. Neurosci 方法。 (1996)

T,Kaneko & N.Mizuno: "Sping stellate call in layer VI of meocortex" Newroreport. 7巻. 2331-2335 (1996)

T.Kaneko 和 N.Mizuno：“Meocortex 第六层中的 Sping 星状调用”Newroreport，第 7 卷，2331-2335 (1996)