中枢神経系の局所神経回路を解析する

分析中枢神经系统的局部神经回路

• 批准号: 12210085
• 负责人: 金子 武嗣
• 金额: --
• 依托单位: Kyoto University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (C)
• 财政年份: 2000
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2000 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-12210085/
• 关键词: 中枢神経系; 局所神経回路; 投射ニューロン; インターニューロン; トランスジェニックマウス; ウィルスベクター; ゴルジ染色様標識; 細胞内染色

1.大脳皮質出力ニューロンを逆行性に細胞体・樹状突起をGolgi染色様に標識する方法により、前もって出力ニューロンを標識したラットの大脳皮質スライス標本を作成した。微小ガラス電極を各層のニューロンに刺入し、基本的な電気的性質を記録してニューロンを分類し、Biocytinを注入した。スライス標本を固定した後、組織学的な検索として免疫蛍光法を用いてBiocytinを注入したニューロンが興奮性あるいは抑制性であるか検討した。次に、Biocytinを注入したニューロンと特にその出力である神経軸索をAvidin-biotinylated peroxi-dase complex法によって青黒色に染色し、逆行性に標識された出力ニューロンの樹状突起をPeroxidase anti-peroxi-dase酵素免疫染色法で赤く染色し、1個のニューロンから一群の大脳皮質投射ニューロンへの連絡を調べた。その結果、興奮性のIII層錐体ニューロンの出力はV層の皮質脊髄投射錐体ニューロンへ多く入力しているが、VI層の皮質視床投射錐体ニューロンへはその4分の1しか入力していないことを見出し報告した。さらに、VI層の錐体ニューロンへの入力を調べII/III層及びV層の錐体ニューロンからの入力は少ないが、IV層・VI層からの入力が多いことを見いだしており、報告をまとめている。2.中枢神経系の投射ニューロンをアデノウィルスベクターあるいはSindbis virusベクターに感染させ、膜移行シグナルを導入したGreen fluorescent protein(pGFP)を発現させ、Golgi染色様に標識することに成功した。3.GABA作動性のインターニューロンをGolgi染色様に染色する手法を、トランスジェニックマウスを利用して作ろうとしている。現在、GABAニューロンのマーカーであるParvalbuminとCalretininというカルシウム結合タンパク質の遺伝子をBACを用いてクローニングしている。Calretininトランスジェニックマウスは作成済みで、pGFPの発現特異性を検討している。

1. The method for identifying the cortical cells by Golgi staining is described in detail below. Micro-electrode penetration into each layer, basic electrical properties recorded, classification, Biocytin injection The results showed that there was no significant difference between the two groups. In addition, Biocytin was injected into the brain axons, Avidin-biotinylated peroxi-enzyme complex method, green staining, retrograde labeling, dendritic processes, Peroxidase anti-peroxi-enzyme immunostaining method, red staining, and one group of large cortical projections. The results showed that the excitatory force of the third layer cone was higher than that of the cortical ridge projection cone of the fifth layer, and that of the cortical ridge projection cone of the sixth layer was higher than that of the fourth layer. The penetration force of the cone of layer VI is adjusted. The penetration force of the cone of layer II/III and layer V is adjusted. The penetration force of layer IV and layer VI is adjusted. 2. Green fluorescent protein(pGFP) was successfully introduced into the central nervous system by Sindbis virus infection, membrane migration and Golgi staining. 3. GABA mobility and its application in Golgi staining Now, GABA is available. Parvalbumin is available. Calretinin is available. Calretinin can be used as a marker to detect the specificity of pGFP.

项目成果

Nobuaki Tamamaki: "Neurons in Golgi-stain-like images revealed by GFP-adenovirus infection in vivo"Neuroscience Research. 32. 231-236 (2001)

Nobuaki Tamamaki：“体内 GFP 腺病毒感染揭示的高尔基染色样图像中的神经元”神经科学研究。

Kousuke Taki: "A group of cortical interneurons expressing μ-opioid receptor-like immunoreactivity : A double immunofluorescence study in the rat cerebral cortex."Neuroscience Research. 98. 221-231 (2000)

Kousuke Taki：“一组表达 μ-阿片受体样免疫反应性的皮质中间神经元：大鼠大脑皮层的双重免疫荧光研究。”神经科学研究。 98. 221-231 (2000)

Takahiro Furuta: "A third group of neostriatal projection neurons : Neurokinin B-producing neurons which send axon fibers to the substantia innominata. "The Journal of Comparative Neurology. 426. 279-296 (2000)

Takahiro Furuta：“第三组新纹状体投射神经元：产生神经激肽 B 的神经元，将轴突纤维发送到无名体。”《比较神经学杂志》。

Takeshi Kaneko: "Predominant information transfer from layer III pyramidal neurons to corticospinal neurons."The Journal of Comparative Neurology. 423. 52-65 (2000)

Takeshi Kaneko：“从第三层锥体神经元到皮质脊髓神经元的主要信息传递。”比较神经学杂志。

Yun-Qing Li: "Intracellular labeling study of neurons in the superficial part of the magnocellular layer of the medullary dorsal horn of the rat."The Journal of Comparative Neurology. 428. 641-655 (2000)

李云清：“大鼠髓质背角大细胞层表层神经元的细胞内标记研究。”《比较神经病学杂志》。