カルシウムーミリストスイッチ機構の原子の原子レベルでの解明

在原子水平上阐明钙-肉豆蔻开关机制

• 批准号: 09680644
• 负责人: 田中 俊之
• 金额: $ 2.18万
• 依托单位: University of Tsukuba
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• 财政年份: 1997
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1997 至 1998
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-09680644/
• 关键词: リカバリン; ニューロカルシン; カルシウムーミリストスイッチ; EFハンド; 多次元NMR; 溶液構造; カルシウム-ミリストイルスイッチ; 化学シフト

リカバリンのN末端は脂肪酸(主にミリストイル酸)で修飾されており、この疎水性部分を利用してカルシウム依存的に細胞膜と相互作用する(カルシウム ーミリストイルスイッチ)。本研究では、リカバリンファミリーに属する蛋白質の詳細なNMR構造解析を行い、このスイッチ機構を原子レベルで理解することを目的とする。1)カルシウム非存在下のリカバリンの構造解析カルシウム非結合状態のリカバリンに関して、βメチレンとメチルのステレオ特異的な帰属を行い、NOESYスベクトルの再解析を行った。この結果、新たに532個の距離情報が得られ、カルシウム非存在下のリカバリンの三次元構造を精密化することに成功した。これにより、疎水性ポケット中のミリストイル基の形状とその周囲の疎水性残基の配置などを明らかにした。2)カルシウム存在下のリカバリンの構造解析カルシウムを結合したリカバリンの各種異種核多次元NMRスペクトルを測定し、常法にしたがつて主鎖及び側鎖のシグナルをほぼ完全に帰属した。次に、この帰属を基にしてNMRスペクトルを解析し、併せて2,438個の距離情報と二面角情報を得た。これらを用いて三次元構造を決定し、ミリストイル基が、カルシウムの結合と運動して蛋白質表面に飛び出すことを明らかにした。また、N末端ドメインの表面に疎水性クレバスが形成されることもわかった。3)カルシウム非存在下のニューロカルシンの構造解析カルシウム非存在下で、ニューロカルシンの各種異種核多次元NMRスペクトルを測定した。現在、約95%の主鎖及び約70%の側鎖の帰属が終了している。帰属された主鎖の^1H、^<13>C、^<15>Nの化学シフトとNOEデータから、二次構造が11本のαヘリックスと4本の短いβストランドから構成されていること、更にこの4本のβストランドが2組の逆平行型βシートを形成していることを明らかにした。

The N-terminal fatty acids (the main fatty acids) and the water-based parts of the fatty acids, which are dependent on the membrane interaction, are used to modify the N-terminal fatty acids. The purpose of this study is to determine whether the protein is used to analyze the NMR, and that the atomic force of the organization is responsible for the understanding of the purpose. 1) if there is no existence, you will need to analyze the data. If you are not in the same state as you are, you will need to know that you are not in the same category as you are. If you do not have the same status, you will need to know that you are in a special situation. If you do not have any information, you will need to analyze the data in the NOESY file. The result of the test, the success rate of the new 532 alienation situation and the non-existence of the three-dimensional precision simulation model. The configuration of water-based residues is different from that of water-based residues in the configuration of water-based residues. 2) in the presence of the system, the system is used to analyze the multi-nuclei of the various nuclear elements of the NMR, the normal method is used to determine the accuracy of the system, and the system is fully registered. For the second time, it is very important to analyze the data of the basic NMR and the dihedral angle of 2438 miles away from each other. In this paper, we use the three-dimensional method to determine the resolution, to determine the resolution, to determine the data base, and to combine the information on the surface of the protein protein to show that it is accurate. The N-terminal, the surface, the surface. 3) in the presence of non-existence, we need to analyze the multi-element NMR of various kinds of nuclei in the non-existent system. At present, about 95% of the owners and about 70% of the owners are registered. This is the main part of the book: 1H, ^ & lt;13>C, ^ & lt;15>N chemistry, NOE physics, secondary production of 11 alpha copies, 4 short copies of the alpha database, and 4 copies of the reverse parallelism of the 4-year-old β-ray.

项目成果

Toshiyuki Tanaka: "Differential Isotope Labeling Strategy for Determining the Structure of Myristoylated Recoverin by NMR Spectroscopy" J.Biomol.NMR. 11. 135-152 (1998)

Toshiyuki Tanaka：“通过 NMR 光谱测定肉豆蔻酰化恢复素结构的差异同位素标记策略”J.Biomol.NMR。