权益分类	功能权益	普通用户	{{item.name}}会员
{{category.name}}	{{benefitItem.name}}

大腸菌の酸耐性発現誘導メカニズムの解明による次世代型感染防除法の構築

通过阐明大肠杆菌耐酸性表达的诱导机制构建下一代感染控制方法

基本信息

批准号：
22KJ0376
负责人：
神田健
金额：
$ 2.83万
依托单位：
University of Tsukuba
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for JSPS Fellows
财政年份：
2023
资助国家：
日本
起止时间：
2023-03-08 至 2025-03-31
项目状态：
未结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-22KJ0376/
关键词：
大腸菌酸応答遺伝子発現転写後調節 RNA RNase

项目摘要

2022年度は、大腸菌tnaA mRNAの分解が酸性条件下で促進される分子メカニズムの解明を目指し、「①pH依存的な分解に関与する制御領域の解析」および「②補助因子の探索」を行った。①「pH依存的な分解に関与する制御領域の解析」についてtnaA遺伝子が構成するオペロン構造（tnaC-tnaA-tnaB）に着目し、制御領域を解析した。まず、オペロン全体をアラビノース誘導性プロモーター（PBAD）に接続したプラスミドpBAD-tnaCABを構築し、大腸菌tnaオペロン破壊株におけるRNA発現レベルを解析した。その結果、弱酸性条件（pH 5.5）におけるtnaA mRNAレベルは、pH 8.0における値の1/10程度に減少していた。PBADの転写活性はpH 8.0と5.5で変化しないことから、このRNAレベルの差は分解による影響であることが示唆され、本プラスミドを用いた実験系が正しく機能していることが確かめられた。そこで、pBAD-tnaCABにおいてtnaCまたはtnaB領域を欠損させた変異型プラスミドを構築し、同様の条件でtnaA mRNAレベルを評価した。その結果、両変異型プラスミドにおいて、pH 8.0と5.5におけるRNAレベルに差は見られなかった。この結果から、pH依存的なtnaA mRNAの分解には、tnaCおよびtnaB領域の両方が関与する可能性が考えられた。②「pH依存的な分解に関与する補助因子の探索」についてtnaオペロンRNAを切断することが報告されているRNase III、および停滞したリボソームを認識してRNAを切断するSmrBをコードする遺伝子に欠損変異を導入し、tnaA mRNA分解に対する影響を評価した。その結果、いずれの欠損変異株でもtnaA mRNAの分解レベルは野生株と変わらず、これらの因子はpH依存的分解には関与しないと考えられた。

In 2022, we conducted the following research projects: "(1) Analysis of pH-dependent degradation and regulatory domain" and "(2) Exploration of helper factors". (1)"Analysis of pH-dependent decomposition and control domain" in tnaA gene structure (tnaC-tnaA-tnaB) analysis of target and control domain The expression of RNA in E. coli was analyzed by pBAD-tNACAB construction and expression of RNA in E. coli strains. As a result, tnaA mRNA expression decreased by 1/10 of pH 8.0 under weak acid conditions (pH 5.5). PBAD's activity varies from pH 8.0 to 5.5, and its RNA content varies from pH 8.0 to pH 5.5. pBAD-tnaCAB gene expression in tnaC and tnaB domain was evaluated under the same conditions. The results were as follows: pH 8.0 and pH 5.5. The results showed that the pH-dependent tnaA mRNA decomposition was related to the tnaC and tnaB domains. (2)"Exploration of pH-dependent degradation and support factors," in which tna mRNA is cut off, tna mRNA is reported to be cut off, RNase III, tna mRNA is reported to be stopped, tna mRNA is reported to be cut off, tna mRNA is reported to be cut off, tna mRNA is reported to be introduced, tna mRNA is reported to be cut off, and tna mRNA is reported to be introduced. The results showed that the breakdown of tnaA mRNA in the deficient plants was related to the pH-dependent breakdown of tnaA mRNA in the wild plants.