ホヤをモデル動物として脳神経系の形成過程を探る

以海鞘为模型动物探索脑神经系统的形成过程

• 批准号: 08680726
• 负责人: 岩佐 達郎
• 金额: $ 1.6万
• 依托单位: Himeji Institute of Technology
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• 财政年份: 1996
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1996 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-08680726/
• 关键词: G蛋白質; 脳・神経; 遺伝子クローニング; ホヤ; 脊椎動物; 情報伝達

本研究では、脊椎動物の祖先形であるホヤ幼生を用いて、その脳神経系の構築過程を明らかにするために、ホヤ幼生の脳神経系のマーカーとなる蛋白質または遺伝子を得ることを目的とした。G蛋白質は種々の細胞の情報伝達に関与していることが明らかにされており、その中でもGoクラスのG蛋白質は脊椎動物では脳神経系に特異的に発現していることがわかっている。本研究に置いても、まず、ホヤのGo蛋白質遺伝子をクローニングすることを試みた。まず脊椎動物G蛋白質で保存されているアミノ酸配列を元にプローブを作製し、ホヤ幼生のcDNAライブラリーをテンペレートにしてPCRを行った。その結果Goクラスに相同性を示すcDNA断片が得られたので、それを用いてcDNAライブラリーをスクリーニングした。その結果、10万クローンのスクリーニングから1個のポジティブクローンを得ることが出来、これをもとに更にライブラリーをスクリーニングすることにより、その全長配列を決定した。このG蛋白質は全長配列ではラットGo、Giと同程度の相同性を示した。しかし、C末端アミノ酸配列を見るとGo、Gi_αに特徴的な百日咳毒素の基質となるシステイン残基が認められないこと、Go_αで保存されているアミノ酸が保存されていないことなどから、ゆるい条件ではGiクラスに含まれるが、新規なサブクラスをつくるG_αであると結論された。ノーザンブロット解析の結果、このG_α遺伝子は未受精卵では発現が認められないが、胚の64細胞期で発現が認められ、発生が進むとともに発現量が増えることがわかった。また、このG_α遺伝子をプローブとしてin situ hybridizationを行い、このG_α遺伝子が尾芽胚期では頭部神経系の限定された細胞に発現していることがわかった。今後この新規G蛋白質遺伝子はホヤ幼生の脳神経系のマーカーとして役立つものと期待される。

The purpose of this study is to investigate the role of vertebrate ancestry in the development of the nervous system. G protein is related to the information transmission of seed cells, and it is related to the specific development of vertebrate nervous system. In this study, we tried to find out the expression of protein gene in the middle of the cell. The vertebrate G protein is preserved in the medium and the acid sequence is produced in the medium and the cDNA sequence is produced in the medium. As a result, the identity of the cDNA fragments was determined. The results of the survey show that the number of visitors to the site is 100,000, and the number of visitors to the site is 100,000. The G protein is aligned to the full length and to the same extent. The base residues of pertussis toxin characterized by Gi_α and Gi_α were identified and preserved under the conditions of Gi_α and Gi_α. The results of the analysis showed that the G_α gene was found in unfertilized eggs, and the embryo was found in 64 cell stage. The G_α gene was developed in situ hybridization, and the G_α gene was developed in the tail bud embryo stage. In the future, the new G protein gene will be used to prepare the nervous system for young people.

项目成果

M. Nakagawa et al.: "Identification of two pclmitoyl groups in octopus rhodopsin." Photochem. Photobiolo. 65 (1). 187-191 (1997)

M. Nakakawa 等人：“章鱼视紫红质中两个 pclmitoyl 基团的鉴定。”

T. Iwasa et al.: "A novel G-protein α-subunit gene expressed in the lasva of Halocynthia roretzi." Eoological Science. 135. 103 (1996)

T. Iwasa 等人：“在 Halocynthia roretzi 的熔浆中表达的一种新型 G 蛋白 α 亚基基因。” Eological Science 135. 103 (1996)