受容体よりアダプター分子Shcを介する増殖、アポトーシス、分化シグナル伝達の解析

受体分子Shc介导的增殖、凋亡和分化信号转导分析

• 批准号: 08680757
• 负责人: 後藤 典子
• 金额: $ 1.41万
• 依托单位: The University of Tokyo
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• 财政年份: 1996
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1996 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-08680757/
• 关键词: アダプター; Shc; Myc; アポトーシス; 細胞増殖; チロシンリン酸化

1.(1)EGF-Rチロシンキナーゼにより、Shcを基質としてin vitroでリン酸化させ、二次元マッピングを行い、Shcの主要なチロシンリン酸化部位は、Y239,Y240,Y317の三つであることを明らかとした。これは、in vivoにおいても確認した。Shcを介する経路を選択的に活性化する、自己リン酸化部位を欠失したEGF-R変異体発現細胞に、Y317FShcまたY239/240FShcを発現させると、EGFによる増殖刺激がはいらなくなった。Ras/MAPKの活性化は、Y317FShc発現細胞は起こせなくなったが、Y239/240FShc発現細胞は、十分に起こせた。一方、C-mycの誘導は、Y317FShc発現細胞は、十分に誘導できたが、Y239/240FShc発現細胞は、抑制されていた。(2)我々は、IL-3によるアポトーシスを抑制するシグナルに、Shcが関与するという結果を得ていたので、見い出したリン酸化部位の関与を調べるため、IL-3依存性BaF/3細胞にShc変異体を発現させた。Y317FShc発現細胞は、アポトーシスを十分に抑制したが、Y239/240FShc発現細胞は、IL-3存在下でもアポトーシスに陥りやすく、c-mycの誘導が抑制された。現在、その下流を解析中である。以上より、Shcの新しいリン酸化部位Y239/240は、EGFによる増殖、またIL-3によるアポトーシスの抑制に重要な未知のシグナル伝達系を活性化し、一部にはc-mycの誘導を起こすことを明らかとした。現在、tet systemにて誘導的にShc変異体をPC12細胞、A431細胞に発現させ、解析している。2.ShcととEGF-Rキナーゼドメインとの融合遺伝子(ER-S)を作り、Grb2との相互作用を、yeast-two hybrid法により調べ、相互作用が起きることが示された。このことは、ER-SのShcの部分が本来の部位にリン酸化を受けており、リン酸化したShcと相互作用する分子を固定することが可能であることを示す。ER-Sをbaitにして、human fetal cDNA libraryをスクリーニングし、新規分子をクローニングし、解析中である。3.様々な組織での発現を期待できるCAGプロモーターの下流、またCre-loxシステムにより全身、さらに部位特異的に発現させられるベクターにY239/240/317F She cDNAをつなぎ、トランスジェニックマウスを作製中である。4.Shcは、増殖因子だけでなく、様々なリガンドによりリン酸化されることが報告されてきている。我々の見い出した未知のシグナル伝達系がこれらの系において、また個体レベルで、どのような役割をもつのか、またそこに関与する分子はどんなものであるかが、現在注目され、重要な課題になっている。

1. (1)EGF-R, Shc, matrix, acid, quadratic, Shc, main, acid, Y239,Y240,Y317.これは、in vivoにおいても确认した。Y239/240FShc is the most important factor in the development of EGF-R. Ras/MAPK activation, Y317FShc development cells, Y239/240FShc development cells, very One side, C-myc induction, Y317FShc development cells, very induction, Y239/240FShc development cells, inhibition (2)IL-3-dependent BaF/3 cells were found to be involved in the regulation of IL-3-dependent BaF/3. Y317FShc cells were inhibited by IL-3, while Y239/240FShc cells were inhibited by IL-3. Now,. The above mentioned new sites Y239/240 are active in EGF, IL-3, IL-4, IL-5, IL-6, IL-7, IL-8, IL-9, IL-9, IL-9, Now, Tet system induced Shc allogeneic PC12 cells, A431 cells to develop and analyze. 2. EGF-R interaction, yeast-two hybrid method, interaction and fusion gene (ER-S) interaction. The ER-S part of the ER-S molecule is immobilized by the interaction of the ER-S molecule with the ER-S molecule. ER-S baits, human fetal cDNA library, new regulatory molecules, analysis 3. The development of tissue is expected to occur in the downstream and downstream regions of CAG. The development of whole body and site-specific tissue is expected to occur in Y239/240/317F. She cDNA is in the process of development. 4. Shc, growth factors are divided into two groups: We are looking forward to seeing you in the middle of the day, and we are looking forward to seeing you in the middle of the day. We are looking forward to seeing you in the middle of the day. We are looking forward to seeing you in the middle of the day.

项目成果

HASEGAWA,H.: "DOCK180,a major CRK-binding protein,alters cell morphology upon translocation to the cell membrane" Mol.Cell.Biol.16. 1770-1776 (1996)

HASEGAWA, H.：“DOCK180 是一种主要的 CRK 结合蛋白，在易位至细胞膜后改变细胞形态”Mol.Cell.Biol.16。

GOTOH,N.: "A novel pathway from phosphorylation of tyrosine residues 239/240 of Shc,contributing to suppress apoptosis by IL-3" EMBO J.15. 6197-6204 (1996)

GOTOH,N.：“Shc 酪氨酸残基 239/240 磷酸化的新途径，有助于通过 IL-3 抑制细胞凋亡”EMBO J.15。