Physiological roles of cell wall-localized cytokinin ribosidase

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2021年度に確立したシロイヌナズナCKR遺伝子（At5g18860）のT-DNA挿入系統（２系統）をMGRL寒天培地上および土耕栽培で生育させ経時的に成長様式の観察を行った。その結果、野生型と比べ目視で確認できる大きな差異はなかった。このことは本研究グループが先行して行っているイネのCKR遺伝子（CPN1）の機能欠失型変異体の成長表現型と同様であった。また、この変異体および野生株に活性型サイトカイニン（トランスゼアチン）とリボシド型前駆体（トランスゼアチンリボシド）を投与した際のサイトカイニン誘導遺伝子マーカー遺伝子（A-タイプ　レスポンスレギュレーター遺伝子）の発現誘導度合いを定量的に比較するための実験条件（処理濃度と処理時間）の検討を行った。さらにCKRの発現部位を調べるためにCKR遺伝子上流のプロモータ領域をレポーター遺伝子（GUS）に連結させたコンストラクトを作成した。CKR酵素タンパク質の生化学的特徴づけについては、メチロトローフ酵母Pichia pastoris内で発現系をpPICZaプラスミドを用いて構築、エレクトロポレーション法で導入し形質転換体を得た。