ビタミンDによる免疫老化におけるエピジェネティック制御機構

本研究の目的は、「T細胞の免疫老化において、ビタミンDによるDNAメチル化・脱メチル化を介したエピジェネティック制御機構を解明すること」である。まずはビタミンDによるT細胞の老化への影響を確認するため、OT-I TCRをCD8T細胞に発現するトランスジェニックマウスからそのCD8T細胞を単離して、特異抗原やサイトカインを含む培地で培養し、活性化中にビタミンDを加えて老化マーカーや老化に関わる遺伝子発現を、それぞれフローサイトメトリーやQPCRによって調べた。その結果、たしかに老化マーカーの表面発現や、細胞周期調節因子などの遺伝子発現プロファイルがビタミンDを加えることで変化することが確認された。一方、本研究の着想時に注目した文献では、ラットの自己免疫疾患モデルにおいてビタミンDがmiRNAのプロモーター領域でDNA脱メチル化を介してその発現を増加させ、下流のサイトカイン遺伝子などの発現を抑制するとのことであった。しかしながら、本研究の実験で用いたOT-I CD8T細胞においてはmiRNAやサイトカインの発現は同様には見られなかった。これは、文献中で用いられたラットCD4T細胞と、本実験で用いたOT-IトランスジェニックマウスCD8T細胞の差異であると考えられる。以上から、その後の実験計画を根本的に考え直し、本研究でビタミンDによる免疫老化への影響が確認されているOT-I CD8T細胞へ引き続き着目して、この細胞からDNAを単離し、全ゲノムのメチル化シーケンシング解析を行うことにした。現在、シーケンシング自体は完了しており、一次解析とクオリティチェックを遂行中である。

本研究の目的は、「T細胞の免疫老化において、ビタミンDによるDNAメチル化・脱メチル化を介したエピジェネティック制御機構を解明すること」である。まずはビタミンDによるT細胞の老化への影響を確認するため、OT-I TCRをCD8T細胞に発現するトランスジェニックマウスからそのCD8T細胞を単離して、特異抗原やサイトカインを含む培地で培養し、活性化中にビタミンDを加えて老化マーカーや老化に関わる遺伝子発現を、それぞれフローサイトメトリーやQPCRによって調べた。その結果、たしかに老化マーカーの表面発現や、細胞周期調節因子などの遺伝子発現プロファイルがビタミンDを加えることで変化することが確認された。一方、本研究の着想時に注目した文献では、ラットの自己免疫疾患モデルにおいてビタミンDがmiRNAのプロモーター領域でDNA脱メチル化を介してその発現を増加させ、下流のサイトカイン遺伝子などの発現を抑制するとのことであった。しかしながら、本研究の実験で用いたOT-I CD8T細胞においてはmiRNAやサイトカインの発現は同様には見られなかった。これは、文献中で用いられたラットCD4T細胞と、本実験で用いたOT-IトランスジェニックマウスCD8T細胞の差異であると考えられる。以上から、その後の実験計画を根本的に考え直し、本研究でビタミンDによる免疫老化への影響が確認されているOT-I CD8T細胞へ引き続き着目して、この細胞からDNAを単離し、全ゲノムのメチル化シーケンシング解析を行うことにした。現在、シーケンシング自体は完了しており、一次解析とクオリティチェックを遂行中である。