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抗原抗体相互作用の動的構造解析を基盤とした高機能抗体の設計

基于抗原抗体相互作用动态结构分析的高功能抗体设计

基本信息

批准号：
13J09564
负责人：
谷中冴子
金额：
$ 3万
依托单位：
Suntory Foundation for Life Sciences
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for JSPS Fellows
财政年份：
2013
资助国家：
日本
起止时间：
2013-04-01 至 2016-03-31
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-13J09564/
关键词：
抗原抗体相互作用動的構造解析 NMR 高親和性抗体の設計緩和分散法

项目摘要

抗原抗体の結合過程がどのように親和性や選択性へ寄与しているのかということに着目し、NMRを用いて抗原抗体相互作用の動的過程を行った。最終年度の3年目はこれまでの実験結果に基づき、高親和性抗体のデザイン手法立案を進めた。現在、抗体のFv部位の揺らぎを変化させることによる親和性向上手法について、論文化を行っているところである。また、新しいターゲットについて同様の手法を適用することが出来ないかを検討している。引き続き本テーマを進めるためには新規の研究費が必要となる。1. 変異体の設計法の提案野生型のHyHEL-10のFvは結合前の状態で大きく揺らいでいるのに対し、結合後は揺らがないということが明らかになった。そこで、結合前で揺らがない状態を達成し、結合後の状態に近づけることで、親和性を向上させることが出来ないか考えた。結合前の揺らぎを指標とし、側鎖が大きく揺らぎの大きい残基をアラニンに置換することで、揺らぎを小さくする方針を取ることとした。また、抗原抗体相互作用界面、埋没残基は直接的に相互作用や構造安定性に影響をあたえるため、変異導入候補から除外した。最終的に、揺らぐ残基全32個の中から10個を選出し、アラニン置換を導入した。その結果、2個の変異体で親和性の向上が見られた。それらの変異体についてNMRを用いた緩和分散法を適用したところ、双方について、抗体のVHドメインで顕著な揺らぎの低下が見られた。この結果は、結合前で揺らがない状態を実現することで、親和性を向上させうることを示すものである。2. 他の抗体を用いた新規デザイン法の妥当性の評価。近年、その安定性と収量の良さから、シングルドメイン抗体の創薬としての有用性が取り立たされている。そこで、シングルドメイン抗体において、揺らぎを制御することによる親和性の向上が可能であるかを検証中である。

The binding process of antigen and antibody is carried out by affinity and selectivity. In the final three years, the results of the study were based on the development of high affinity antibody detection methods. Now, the Fv part of the antibody is changed, and the affinity is increased. The culture is changed. The new method is applied to the new method. The new regulations are necessary. 1. The Fv of wild type HyHEL-10 is in the state before binding, and after binding. Before binding, the state is reached, after binding, the state is near, the affinity is upward, and the state is out. In combination with the preceding paragraph, the following paragraphs were adopted: Antigen-antibody interaction interface, buried residues, direct interaction, structural stability, etc. Of the 32 residues in the final sequence, 10 were selected and replaced. The result is that the affinity of two different species can be seen upward. For example, if you want to use the method of moderate dispersion, you can use the method of moderate dispersion. If you want to use the method of moderate dispersion, you can use the method of moderate dispersion. The result of this is that the state of the binding is present, and the affinity is present. 2. Evaluation of the appropriateness of the new method for antibody detection. In recent years, the stability and yield of antibodies have improved, and the usefulness of antibodies has increased. For example, if the antibody is detected, the affinity of the antibody may be increased.