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筋強直性ジストロフィーの治療及び発症機構の解明

强直性肌营养不良的治疗及其发病机制的阐明

基本信息

批准号：
13J08474
负责人：
小穴康介
金额：
$ 1.92万
依托单位：
The University of Tokyo
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for JSPS Fellows
财政年份：
2013
资助国家：
日本
起止时间：
2013-04-01 至 2016-03-31
项目状态：
已结题

项目摘要

筋強直性ジストロフィー(DM)において、クロライドチャネル遺伝子CLCN1の選択的スプライシング異常は筋強直の原因となるため注目され、研究されてきた。申請者はマウスにおいてClcn1の異常スプライシングを改善する低分子化合物であるmanumycin Aを発見した。本研究の目的はその効果や作用機序を明らかにすることである。先行研究により、manumycin AがRasタンパク質の機能を阻害する事が明らかになっている。これまでにRNAiによりH-Ras、N-Ras、K-Rasのノックダウンを行った際に、H-RasとN-Rasをノックダウンすると、Clcn1の異常スプライシング産物が減少した。そこで、Rasを発現ベクターにクローニングし、培養細胞に過剰発現させ、Clcn1スプライシングへの影響を調べた。H-Ras、N-Ras、K-Rasの3種類のRas及び、その変異体を合わせて14種を発現ベクターにクローニングした。変異体として、活性が高まる変異体とドミナントネガティブ効果をもたらす変異体を作製した。その結果、H-Ras、N-Ras、K-Rasの全てにおいて、Clcn1の異常型スプライシング産物の増加傾向が見られた。特にH-RasとN-Rasを発現させた際は、K-Rasを発現させた場合に比べて、Clcn1の異常型スプライシング産物が増加する傾向が見られた。また、各Rasの活性型変異体を発現させた際のClcn1のスプライシングは、野生型のRasを発現させた場合と比較して、特に顕著な差は見られなかった。一方で、各Rasのドミナントネガティブ効果をもたらす変異体を発現させると、異常型Clcn1スプライシング産物の割合は減少し、対照として用いたベクターを発現させたときと同程度になった。

The reason of abnormal tendon stiffness is studied in detail. The applicant found that the low molecular weight compound manumycin A was an abnormal condition of Clcn1. The purpose of this study is to clarify the mechanism of action. In advance, we studied the function of manumycin A and Ras in order to prevent it from happening. This reduces the production of RNAi products such as H-Ras, N-Ras, K-Ras and N-Ras. In addition, Ras development, cell culture, and Clcn1 development were also investigated. H-Ras, N-Ras and K-Ras are three kinds of Ras and two kinds of Ras. The activity of the enzyme is very high, and the activity of the enzyme is very low. As a result, the complete elimination of H-Ras, N-Ras, and K-Ras, and the increasing trend of abnormal protein synthesis products of Clcn1 are visible. In particular, H-Ras and N-Ras have a tendency to increase in the occurrence of abnormal species compared to Clc1. In addition, the expression of Ras in the wild type is different from that in the active type. The results of the analysis show that the abnormal type of Ras is similar to the abnormal type of Ras.