BIOSYNTHETIC PATHWAY FOR STREPTOCOCCAL GLYCOPROTEINS

链球菌糖蛋白的生物合成途径

基本信息

  • 批准号:
    2131858
  • 负责人:
  • 金额:
    $ 11.07万
  • 依托单位:
  • 依托单位国家:
    美国
  • 项目类别:
  • 财政年份:
    1995
  • 资助国家:
    美国
  • 起止时间:
    1995-09-30 至 2000-07-31
  • 项目状态:
    已结题

项目摘要

DESCRIPTION (Adapted from applicant's abstract): The S. sanguis Platelet Aggregation-associated Protein (PAAP) has been isolated as a precursor N-formylmethionyl glycoprotein of 115 kDa. While other prokaryotic glycoproteins have been suggested in the literature, this is the first protein from a Gram-positive organism shown by direct experimental evidence to have covalently associated carbohydrate. Preliminary studies also suggest that the carbohydrate polymers are not present in the wall-associated form of PAAP. Therefore, by studying PAAP biosynthesis and export, S. sanguis provides a unique model system to understand the novel biosynthetic pathway of prokaryotic glycoproteins. The applicant hypothesizes that PAAP provides a mechanism for incorporation of carbohydrate polymers onto the cell wall of S. sanguis. Acting as a co-transporter, PAAP may translocate the carbohydrate through the membrane in covalent association with the exported protein. Once PAAP is transported, the carbohydrate oligosaccharides may be cleaved from the protein backbone and transferred to other cell wall components, such as lipid or peptidoglycan. To test this hypothesis, the specific aims of this research project are to: 1) identify and characterize the cell wall component which contains the PAAP oligosaccharides, 2) isolate the S. sanguis oligosaccharyltransferase responsible for the intracellular transfer of oligosaccharide to the PAAP protein backbone, 3) isolate the glycosidase/transferase(s) responsible for removal and transfer of oligosaccharides from the exported PAAP protein to another site in the cell wall, 4) biochemically characterize the isolated proteins/enzymes associated with intracellular and wall-associated transfer of the oligosaccharides, and 5) screen for these proteins/ enzymes in other streptococci. To accomplish these aims, immunologic, biochemical and molecular biological techniques will be employed. The elucidation of this biosynthetic pathway for streptococcal glycoproteins may impact the understanding of other biosynthetic pathways, such as eukaryotic glycoprotein biosynthesis and prokaryotic cell wall polysaccharide synthesis. The cell walls of oral streptococci are rich in polysaccharides, and, if these structures are cotransported to the cell surface as part of the PAAP glycoprotein, identification of the glycosylation pathway may suggest strategies to alter the function of these polysaccharides.
描述(摘自申请者的摘要):血缘沙门氏菌 血小板聚集相关蛋白(PAAP)已被分离出来作为一种 前体N-甲酰甲硫基糖蛋白,大小为115 kDa。而其他人 原核糖蛋白已经在文献中被提出,这是 来自革兰氏阳性生物体的第一种蛋白质 实验证据表明存在共价缔合的碳水化合物。 初步研究还表明,碳水化合物聚合物不是 以与壁相关的PAAP形式存在。因此,通过对PAAP的研究, 生物合成和输出,血链球菌提供了一个独特的模型系统来 了解原核糖蛋白生物合成的新途径。 申请人假设PAAP提供了一种机制 糖类聚合物与血链球菌细胞壁的结合。 作为共转运体,PAAP可以通过 膜与输出蛋白共价结合。一次 PAAP被运输,碳水化合物低聚糖可能被裂解 从蛋白质骨架转移到其他细胞壁成分, 例如脂类或肽多聚糖。为了检验这一假设,具体的 本研究项目的目的是:1)识别和表征 含有PAAP寡糖的细胞壁成分,2)分离 血链球菌低聚糖转移酶负责 低聚糖在细胞内转移到PAAP蛋白骨架, 3)分离负责清除和转移的糖苷酶/转移酶(S) 低聚糖从输出的PAAP蛋白转移到另一个蛋白 在细胞壁中的位置,4)对分离的 与细胞内和壁相关的蛋白质/酶 低聚糖的转移,以及5)筛选这些蛋白质/ 其他链球菌中的酶。为了实现这些目标,免疫学, 将采用生化和分子生物学技术。这个 链球菌糖蛋白生物合成途径的阐明 可能会影响对其他生物合成途径的理解,例如 真核糖蛋白的生物合成与原核细胞壁 多糖类合成。口腔链球菌细胞壁丰富 在多糖中,如果这些结构被共运输到 细胞表面作为PAAP糖蛋白的一部分,鉴定 糖基化途径可能提示改变细胞功能的策略 这些多糖。

项目成果

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