FAS REGULATES T CELL DEVELOPMENT/FUNCTION IN 1PR MICE

FAS 调节 1PR 小鼠 T 细胞发育/功能

• 批准号: 2672363
• 负责人: Ralph C Budd
• 金额: $ 25.34万
• 依托单位: UNIVERSITY OF VERMONT & ST AGRIC COLLEGE
• 依托单位国家: 美国
• 财政年份: 1996
• 资助国家: 美国
• 起止时间: 1996-09-01 至 2000-08-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://reporter.nih.gov/project-details/2672363
• 关键词: CD3 molecule; CD95 molecule; DNA binding protein; MHC class I antigen; T cell receptor; T lymphocyte; apoptosis; biological signal transduction; cell differentiation; genetically modified animals; human tissue; interleukin 2; laboratory mouse; lymphocyte proliferation; thymectomy; thymus; thymus transplantation

DESCRIPTION (Adapted from Investigator's abstract): This application is based on two new paradigms to explain two enigmas regarding the function of Fas. First, in the absence of Fas expression in lpr mice, a phenotypically unusual population of CD4-8- B220+ TCR alpha beta+ cells accumulates. Paradigm 1 proposes that this phenotype results from high intensity TCR signals which, in normal mice, results in apoptosis. Second, Fas (like CD28) activates Jun kinase (JNK) and can induce apoptosis, as well as costimulate with CD3 on resting T cells to augment IL-2 production and proliferation. Paradigm 2 suggests that the balance of MAPK and JNK determines the functional outcome; dominance of JNK will favor apoptosis, whereas a balance of MAPK/JNK rescues cells and favors proliferation. Specific Aim 1 develops Paradigm 1 by use of a new TCR transgenic lpr strain known as OVA-tcr-1 lpr/lpr that recognizes ovalbumin (OVA) peptide, SIINFEKL. Administration of SIINFEKL variants will confer different signal intensities. Moderate TCR signals will yield accumulation of only CD8+ cells, while peptides providing a high intensity signal will promote CD4-8- clonotype TCR+ cells. The latter will be deleted (detected by TUNEL assay) in OVA-tcr-1 +/+ mice and retained in OVA-tcr-1 lpr/lpr mice. The second part will address another long standing debate whether lpr CD4-8- T cells are generated in the thymus or periphery. Thymectomy of beta 2m-/- lpr/lpr mice and beta 2m+/+ lpr/lpr mice, will be followed by thymic transplant of the opposite genotype. This will selectively re-express class I in either the thymus or the periphery, and appearance of CD4-8- T cells monitored. Specific Aim 2 develops Paradigm 2 by examining the importance of JNK activation in Fas signaling using dominant positive and negative variants of downstream c-Jun, and upstream Rac and Cdc42, members of the Rho family of GTP-binding proteins that activate JNK. In addition, rescue from apoptosis by Fas will be attempted using a dominant positive MAPK. Finally, this model is applied to two normal immune situations of apoptosis versus proliferation to examine the levels of MAPK and JNK. Specific Aim 3 extends Paradigm 2 to Fas costimulation with CD3 of IL-2. The prediction is that Fas will enhance activity of transcription factors that use c-Jun, namely AP-1 and NFAT. Functional confirmation will use NFAT-luciferase and AP-1-luciferase transgenic mice. Finally, a novel alternate lpr NFAT-binding suppressor protein will be purified, and its suppressor function confirmed using NFAT-luciferase/lpr mice.

描述（改编自研究者的摘要）：该应用程序是 基于两个新范式来解释有关功能的两个谜团 法斯。首先，在 lpr 小鼠中缺乏 Fas 表达的情况下，表型 CD4-8-B220+ TCR αβ+ 细胞异常群体积累。 范式 1 提出该表型是高强度 TCR 的结果 在正常小鼠中，该信号会导致细胞凋亡。 其次，Fas（如 CD28) 激活 Jun 激酶 (JNK) 并可诱导细胞凋亡，以及 与静息 T 细胞上的 CD3 共刺激以增加 IL-2 的产生 增殖。 范式 2 表明 MAPK 和 JNK 的平衡 决定功能结果； JNK 的主导地位将有利于细胞凋亡， 而 MAPK/JNK 的平衡可以拯救细胞并有利于增殖。 具体目标 1 通过使用新的 TCR 转基因 lpr 菌株开发范例 1 称为 OVA-tcr-1 lpr/lpr，可识别卵清蛋白 (OVA) 肽， SIINFEKL。 SIINFEKL 变体的管理将赋予不同的信号 强度。 中等 TCR 信号将仅产生 CD8+ 的积累 细胞，而提供高强度信号的肽将促进 CD4-8- TCR+细胞克隆型。 后者将被删除（通过TUNEL检测检测） 在 OVA-tcr-1 +/+ 小鼠中，并在 OVA-tcr-1 lpr/lpr 小鼠中保留。 第二个 部分将解决另一个长期存在的争论：lpr CD4-8- T 细胞是否 产生于胸腺或外周。 β 2m-/- lpr/lpr 胸腺切除术 小鼠和 β 2m+/+ lpr/lpr 小鼠，随后将进行胸腺移植 相反的基因型。 这将选择性地重新表达 I 类 胸腺或外周，并监测 CD4-8-T 细胞的出现。 具体目标 2 通过检查 JNK 的重要性来开发范式 2 使用显性阳性和阴性变体激活 Fas 信号传导 下游 c-Jun，上游 Rac 和 Cdc42，Rho 家族成员 激活 JNK 的 GTP 结合蛋白。 此外，还可以挽救细胞凋亡 Fas 将使用显性阳性 MAPK 进行尝试。 最后，这个 模型应用于两种正常免疫情况：细胞凋亡与 增殖以检查 MAPK 和 JNK 的水平。 具体目标 3 延伸 Fas 与 IL-2 的 CD3 共刺激的范例 2。 预测是 Fas会增强使用c-Jun的转录因子的活性，即 AP-1 和 NFAT。 功能确认将使用 NFAT-荧光素酶和 AP-1-荧光素酶转基因小鼠。 最后，一个新颖的替代 lpr NFAT结合抑制蛋白将被纯化，其抑制蛋白 使用 NFAT-荧光素酶/lpr 小鼠证实功能。