FRAMEWORK LINKAGE MAP FOR CHROMOSOME 14

我们将探讨基因绘图系统的可行性， 含有单核苷酸的多态性序列标记位点（pSTS） 替代品 我们开发了一个自动化系统， 简单的双等位基因标记，与现有的DNA相比具有几个优点 分型方法 它是自动化的，具有高通量（1200 反应/天）。 它有一个简单的读数，直接由一个 电脑 试剂，寡核苷酸，是稳定和安全的 （非同位素）。 该分析易于学习，并依赖于两个广泛使用的 聚合酶链反应（PCR）和酶联免疫吸附试验（ELISA） 免疫吸附测定（ELISA）。 此外，我们发现， 可以获得具有高杂合性（> 70%）的连锁双等位基因pSTS。 因此，连锁的双等位基因pSTS可以像手动分型一样提供信息。 简单或复杂的重复。 我们将使用双等位基因pSTS构建人类基因组的框架图谱， 14号染色体，平均标记间距为10至15 cM。 我们将 使用来自M13的序列从基因组DNA样品获得随机pSTS 流式分选的人14号染色体文库。 这些pSTS将迅速 并通过信息CEPH的遗传连锁分析自动排序 家庭 一旦获得框架染色体图谱，我们将分离YAC 每个框架标记的克隆。 这将产生物理锚， 框架图，并将提供一个序列的来源，以获得 其它pSTS与每个框架标志物连接。 结合链接 每个构架位置的双等位基因pSTS将形成索引标记（3 4个连锁pSTS）的高杂合性（> 70%）。 这将产生一个 人类14号染色体的框架图， 分型以检测人类致病基因的遗传连锁，或 表型性状

We will explore the feasibility of a genetic mapping system using polymorphic sequence-tagged sites (pSTSs) containing single nucleotide substitutions. We have developed an automated system for typing these simple biallelic markers that has several advantages over existing DNA typing methods. It is automated and has high throughput (1200 reactions/day) . It has a simple readout that is read directly by a computer. The reagents, oligonucleotides, are stable and safe (non-isotopic). The assay is easy to learn and relies on two widely used procedures, the polymerase chain reaction (PCR) and enzyme-linked immunosorbent assays (ELISAs). Furthermore , we find that clusters of linked biallelic pSTSs can be obtained with high heterozygosity (> 70%). Therefore, linked biallelic pSTSs can be as informative as manually typed simple or complex repeats. We will use biallelic pSTSs to construct a framework map of human chromosome 14 with an average marker spacing of 10 to 15 cM. We will obtain random pSTSs from genomic DNA samples using sequences from M13 libraries of flow-sorted human chromosome 14. These pSTSs will be rapidly and automatically ordered by genetic linkage analysis of informative CEPH families. Once a framework chromosome map is obtained, we will isolate YAC clones for each framework markers. This will produce physical anchors for the framework map and will also provide a source of sequences to obtain other pSTSs linked to each of the framework markers. Combined the linked biallelic pSTSs for each framework location will form an index marker (3 to 4 linked pSTSs) of high heterozygosity (> 70%). This will generate a framework map for human chromosome 14 that can be rapidly and automatically typed to detect genetic linkage of human disease-causing genes or phenotypic traits.