Study of stability genes of E. faecalis plasmid pAD1
粪肠球菌质粒pAD1稳定性基因的研究
基本信息
- 批准号:6678693
- 负责人:
- 金额:$ 23.4万
- 依托单位:
- 依托单位国家:美国
- 项目类别:
- 财政年份:1999
- 资助国家:美国
- 起止时间:1999-05-01 至 2007-06-30
- 项目状态:已结题
- 来源:
- 关键词:Bacillus subtilis Enterococcus bacterial RNA bacterial genetics bacterial proteins bacterial toxins cell membrane chemical stability endopeptidases genetic manipulation genetic promoter element genetic regulation genetic transcription genetic translation intermolecular interaction mass spectrometry nucleic acid sequence nucleic acid structure plasmids site directed mutagenesis yeast two hybrid system
项目摘要
Enterococcus faecalis is a Gram-positive bacterium and a member of the normal flora of the
intestinal tract. It is also capable of causing opportunistic infection and has gained
notoriety recently because of a propensity to rapidly accumulate antibiotic resistance genes.
These genes are commonly located on mobile genetic elements that facilitate their dissemination
to other bacterial species. The objective of this proposal is to determine the molecular
mechanism of action of a genetic locus, par, required for the stable inheritance of the
pheromone-responsive conjugative plasmid pAD1. Par operates via a post-segregationat killing
mechanism, programming for death any cell that loses the plasmid. Par is regulated by a unique
mechanism involving inhibition of toxin translation by interaction of its message with an
antisense RNA at multiple dispersed sites and the formation of a stable complex. The goal of
Aim 1 of this proposal is to determine the mechanism by which the complex is activated for
translation in plasmid-free segregants. This will involve transcriptional analysis of the par
RNAs, identification of sequence elements and RNases involved in complex degradation, and
evaluation of sequence elements required for stability of the toxin mRNA. Expression of the par
toxin, Fst, disrupts the integrity of the host cell membrane. The goal of Aim 2 of this
proposal is to determine the mechanism of action of Fst. Two models of Fst function, one
involving processing by cellular proteases and one involving selective action at the internal
surface of the cytoplasmic membrane, will be tesed. In addition, the characteristics of Fst-resistant mutants will be determined in an effort to identify the specific target of Fst.
Finally, saturation mutagenesis will be performed on Fst in an effort to identify which amino
acids are essential for its activity.
粪肠球菌是一种革兰氏阳性细菌,是肠道正常植物群的成员。
肠道它也能引起机会性感染,
最近,由于抗生素抗性基因的快速积累倾向,
这些基因通常位于便于其传播的移动的遗传元件上
其他细菌物种。本建议的目的是确定分子
作用机制的遗传位点,PAR,所需的稳定遗传的
信息素应答接合质粒pAD 1。Par通过一种后隔离的杀戮方式运作
机制,编程死亡任何细胞失去质粒。Par由一个独特的
涉及通过其信息与一种蛋白质相互作用来抑制毒素翻译的机制
反义RNA在多个分散的位点上,并形成稳定的复合物。的目标
本提案的目的1是确定复合物被激活的机制,
在无质粒分离子体中的翻译。这将涉及对par的转录分析。
RNA,鉴定参与复杂降解的序列元件和RNA酶,以及
评价毒素mRNA稳定性所需的序列元件。面值的表示
毒素Fst破坏宿主细胞膜的完整性。目标2的目标
建议是确定FST的作用机制。Fst函数的两种模型,一种
一种涉及细胞蛋白酶的加工,另一种涉及内部的选择性作用,
细胞膜的表面,将被测试。此外,Fst抗性突变体的特征将被确定,以确定Fst的特异性靶标。
最后,将对Fst进行饱和诱变,以鉴定哪个氨基酸与Fst结合。
酸是其活性所必需的。
项目成果
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