Building the cardiovascular system in early embryos

在早期胚胎中构建心血管系统

基本信息

  • 批准号:
    2586082
  • 负责人:
  • 金额:
    --
  • 依托单位:
  • 依托单位国家:
    英国
  • 项目类别:
    Studentship
  • 财政年份:
    2021
  • 资助国家:
    英国
  • 起止时间:
    2021 至 无数据
  • 项目状态:
    未结题

项目摘要

The cardiovascular system forms early in development to support growth and survival of the embryo. This project aims to identify transcriptional mechanisms governing early steps of progenitor cell specification using an avian model of heart development. Evolutionary conservation of these mechanisms will be assessed in the amphibian, Xenopus laevis.Cis-regulatory elements (CRE) associated with Nkx2.5 and Cer1, two genes that are essential for normal heart formation, have previously been identified. Pilot experiments, using Citrine-fluorescent reporters, show that the CREs become active early - in prospective cardiovascular cell lineages that will contribute to the heart and vessels.To identify upstream regulators of early fate decisions, the project will involve characterizing these CREs in vivo. Electroporation of Citrine-reporters followed by time-lapse imaging will determine the timing of activation and cell types will be identified using co-staining with known markers. The Wnt and BMP signaling pathways are important for cardiac development and their effect on CRE activity will be examined. Motif search and footprint analysis will identify candidate transcription factor (TF) binding sites and mutagenesis will determine their functional importance. Furthermore, important TF sites will be edited by using CRISPR approaches. Finally, whether CREs are functionally conserved across species will be tested using microinjections in Xenopus as well as transgenic embryos and tadpoles.
心血管系统在发育早期形成,以支持胚胎的生长和存活。本项目旨在利用鸟类心脏发育模型确定控制祖细胞规范早期步骤的转录机制。这些机制的进化保护将在两栖动物爪蟾(Xenopus laevis)中进行评估。与Nkx2.5和Cer1相关的顺式调控元件(CRE)是正常心脏形成所必需的两个基因,此前已被发现。利用黄嘌呤荧光报告基因进行的初步实验表明,cre在对心脏和血管有贡献的潜在心血管细胞谱系中变得早期活跃。为了确定早期命运决定的上游调节因素,该项目将涉及在体内表征这些cre。柠檬酸报告蛋白的电穿孔和延时成像将决定激活的时间,细胞类型将通过与已知标记物的共染色来确定。Wnt和BMP信号通路对心脏发育很重要,它们对CRE活性的影响将被研究。基序搜索和足迹分析将确定候选转录因子(TF)结合位点,诱变将确定其功能重要性。此外,重要的TF位点将使用CRISPR方法进行编辑。最后,cre是否在物种间具有功能保守性将在爪蟾、转基因胚胎和蝌蚪中进行显微注射测试。

项目成果

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知道了