Identification and Role of Type IV Secretion Effector Proteins in Coxiella burnetii

人类的急性呼吸道感染和慢性呼吸道感染都是由柯克斯氏杆菌引起的，这种细菌使人口贩运变得更容易。 并在含有柯克斯体的空泡病毒(CCV)中复制细胞。病毒感染会抑制巨噬细胞生长。 激活是以一种依赖于系统的方式进行的，因此我们的中枢神经系统假说是正确的。 T4SS依赖的药物效应器分子在体外和体内的表征将不会定义这种“隐形”。 毒力与基因。这项新的应用程序将无法识别T4SS依赖的毒力及其决定因素。 通过使用病原体和效应器来调节巨噬细胞的信号转导通路，并利用突变体来调节信号转导。 突变体认为，它们对于限制基因复制或调节对病毒感染的反应来说是必不可少的。他们的目标是1。 确定T4SS依赖的巨噬细胞操纵率的范围。支持最新的工作原理假说。 在巨噬细胞中，有多个T4SS效应器可以操纵对感染病毒的反应。现在使用的是一种主要的治疗方法。 骨髓来源的巨噬细胞集落刺激因子(BMDM)是一种细胞培养方法，它能够使卡氏杆菌RSA439(NMII)成为可能。 我们将使用转录转录技术(包括单个细胞)来广泛研究BMDM的特征。 分析)、代谢组学和流式细胞仪分析，以全面绘制T4SS依赖的基因图谱。 巨噬细胞活化的调控途径。目的：2.确定T4SS的效应因子。 操纵免疫信号。最有效的假说是T4SS信号效应器针对特定的信号。 激活信号通路。为了更好地识别这类广泛的T4SS信号效应器，被标记为C.kburnetii。 T4SS的底物将在信号转导激动剂的环境下被进一步转化为巨噬细胞。 补充性的方法是使用T4SS和突变体来识别它不能完全调节的感染。 与生俱来的激活。目标：3.建立T4SS效应器信号调制的机制基础。 从初步数据中获得的候选基因包括；;(A)和2；Ankyrin和含有重复序列的蛋白质，其中包括： 抑制激动剂(NF-κb；;)和5个T4SS效应器，认为它们是BMDM；;和复制过程中必不可少的因素。 C)3个T4SS效应分子，这些效应分子将交通流量传递给核心分子(核调素)。我们将不会确定谁是结合的宿主。 合作伙伴使用下拉式方法定义他们在疾病中的主要角色，使用宿主的下拉式方法。 基因敲除的方法。每个效应基因都将被分析，要么是TN基因，要么是位点特定的基因突变体。

Acute and chronic Q fever infections in humans are caused by Coxiella burnetii, which traffics to  and  replicates  in  Coxiella-­containing  vacuoles  (CCV).  Infection  suppresses  macrophage  activation  in  a  type  4  secretion  system-­dependent  manner,  hence  our  central  hypothesis  is  characterization of T4SS-­dependent effector molecules in vitro and in vivo will define “stealthy”  virulence  genes.  This  application  will  identify  T4SS-­dependent  virulence  determinants  that  modulate  macrophage  signaling  pathways  using  pathogen  effector  mutants  and  host  signaling  mutants  that  are  essential  for  restricting  replication  or  modulating  response  to  infection.  Aim  1.  Identify the range of T4SS dependent manipulation of macrophage. The working hypothesis  is multiple T4SS effectors manipulate the response to infection in macrophages. Using a primary  bone marrow derived macrophage (BMDM) cell culture that enables C. burnetii, RSA439 (NMII)  to  replicate.  We  will  extensively  characterize  BMDM  using  transcriptomic  (including  single  cell  analysis), metabolomics and flow cytometric analysis to comprehensively map T4SS dependent  pathway  modulation  of  macrophage  activation.  Aim  2.  Identify  T4SS  effectors  which  manipulate  immune  signaling.  The  working  hypothesis  is  T4SS  effectors  target  specific  activation  signaling  pathways.  To  identify  this  broad  class  of  T4SS  effectors,  tagged  C.  burnetii  T4SS  substrates  will  be  transfected  into  macrophages  in  the  context  of  signaling  agonists.  A  complementary  approach  will  use  T4SS  mutants  to  identify  infection  that  does  not  modulate  innate activation. Aim 3. Establish mechanistic basis for T4SS effector modulation. Current  candidates derived from preliminary data include;; a) 2 Ankyrin repeat-­containing proteins which  dampen agonist driven NF-­κb;; b) 5 T4SS effectors that are essential for replication in BMDM;; and  c)  3  T4SS  effectors  which  traffic  to  the  nucleus  (nucleomodulins).  We  will  identify  host  binding  partners  using  pull-­down  methods  and  define  their  role  in  disease  using  host  knock-­down  or  knock-­out approaches. Each effector will be analyzed with either Tn or site-­specific mutants.