HIV-1 Tat蛋白增强KSHV Kaposin A致瘤及其信号通路

本项目研究中，我们运用分子克隆、基因转染、RT-PCR和Western blot等技术鉴定并获得了稳定表达KSHV Kaposin A、HIV-1 Tat、Kaposin A + Tat蛋白的单个细胞克隆。软琼脂集落、3H-TdR掺入和流式细胞术检测结果表明，Tat蛋白在体外可以增强Kaposin A诱导细胞增殖。动物试验的结果显示，Tat能够在裸鼠体内增强Kaposin A诱导肿瘤形成。cDNA芯片技术并配合显性负相质粒（dominant-negative construct，DN）过表达试验证明，Tat是通过调控MEK/ERK MAPK、PI3K/Akt和JAK2/STAT3多个信号通路加速Kaposin A在裸鼠体内诱导肿瘤的生成。. 进一步，采用慢病毒载体介导Tat和KSHV的另一致瘤基因vIL-6感染内皮细胞，运用MTT、CCK-8、软琼脂培养、平板克隆、流式细胞术及微管形成等实验进行细胞增殖、克隆形成、细胞周期和微管形成进行分析。运用鸡胚绒毛尿囊膜（chick chorioallantoic membrane，CAM）和裸鼠模型体内观察Tat对vIL-6诱导血管生成和肿瘤形成的影响。结果表明，Tat不仅可以促进vIL-6在体外诱导细胞增殖、克隆形成、细胞从G0/G1向S期转换和微管形成，而且能够增强vIL-6在CAM和裸鼠模型上诱导血管生成和肿瘤形成。机制方面的研究表明，Tat并不影响vIL-6的表达，而是通过促进vIL-6活化PI3K/AKT、抑制PTEN/GSK-3β信号通路参与了血管生成和肿瘤形成；过表达PTEN和GSK-3β、抑制PI3K和AKT的磷酸化均能明显抑制Tat增强vIL-6诱导的血管生成和肿瘤形成。提示，Tat通过调控PTEN/PI3K/AKT/GSK-3β信号通路促进vIL-6诱导血管生成和肿瘤形成。IHC染色结果显示，Tat增强vIL-6诱导血管生成和肿瘤形成的同时也促进了VEGF、b-FGF和Cylin D1的表达。. 总之，完成该项目后在SCI收录期刊上共发表研究论文6篇，累计影响因子超过25。项目实施期间共培养3位博士研究生和5名硕士研究生。另外，仍有1名博士后在站和1名博士研究生在读。