副溶血性弧菌转录调控子OpaR的功能研究

OpaR 和AphA是副溶血性弧菌密度感应（quorum sensing，QS）系统的两个核心调控子，目前对它们功能的认识还比较肤浅。本研究首先构建了OpaR/AphA及其同源蛋白的DNA结合基序，进而利用基序对副溶血性弧菌QS系统信号传递所需关键基因的启动区进行了预测，结果显示在opaR、aphA和qrr的启动子区均含有与基序相似的序列，表明这些基因可能是OpaR和AphA直接的靶基因；因此，在构建opaR 和aphA突变株和回补株的基础上，利用LacZ报告基因融合实验、引物延伸实验、DNA 酶I 足迹实验等分子生化实验，深入研究了OpaR和AphA对opaR、aphA和qrr的转录调控机制，从而证明了副溶血弧菌QS系统信号传导机制与其亲缘弧菌的类似，为后续研究打下坚实的理论基础；另外，本研究还利用一系列表型实验技术，系统分析了AphA对副溶血弧菌毒力表型、生物膜形成能力、泳动能力、群集性爬动能力等表型的调控，证明了AphA能促进副溶血弧菌毒力、生物膜形成和运动性，据此我们可以初步推测OpaR调控的表型效应；利用经典的分子生化实验技术，本研究还系统分析了OpaR对hcp1，以及OpaR和AphA对cpsQ-mpfABC位点的联合调控机制，从而为理解QS系统调控副溶血弧菌适应性和致病性机制提供一定的理论依据。