乳杆菌素LB-B1抑菌机理及其结构基因鉴定的研究

随着生活水平的提高，食品防腐剂的安全性问题日益受到人们的关注。乳酸菌细菌素是一种天然的食品防腐剂，因具有高效、无毒、无残留、无抗药性等优点而受到了极大的重视。本论文对从新疆酸马奶中筛选的植物乳杆菌LB-B1所产的细菌素进行系统研究，实验结果为该细菌素在食品中的应用提供理论依据，研究内容如下：（1）新疆酸马奶中产细菌素菌株的筛选和鉴定：从新疆地区收集的10份酸马奶中分离出64株乳酸菌，其中一株乳杆菌对单核细胞增生李斯特氏菌54002具有较强的抑 菌活性。经排除有机酸、过氧化氢等干扰后，确定该抑菌物质为细菌素。菌株经16S rRNA分子水平鉴定为植物乳杆菌，命名为植物乳杆菌LB-B1。.（2）确定植物乳杆菌LB-B1产细菌素的最佳培养条件为：37℃静置培养14h，培养基初始pH值为7。培养基成分为：葡萄糖30g/L、胰蛋白胨10g/L、牛肉膏10g/L、酵母粉5g/L、无水乙酸钠5g/L、柠檬酸铵2g/L、磷酸氢二钾2g/L、硫酸镁0.58g/L、硫酸锰0.25g/L、吐温-80 4mL/L。优化后，植物乳杆菌素LB-B1产量达10240AU/ml，提高了3倍。.（3）植物乳杆菌素LB-B1理化性质确定：植物乳杆菌素LB-B1具有良好的酸碱稳定性（pH2~10）和热稳定性（121℃，15min）。以单增李斯特菌54002为指示菌，测得该细菌素的作用方式为杀死细菌但不裂解细胞。该细菌素抑菌谱较广且对敏感菌株和拮抗菌株都有吸附性。利用透析实验结合Tricine-SDS-PAGE分析测得植物乳杆菌素LB-B1的分子量在3.5~6.2kDa之间。.（4）植物乳杆菌素LB-B1的基因簇结构分析：根据目前发表的植物乳杆菌素的基因簇序列，设计7对保守引物。以植物乳杆菌LB-B1基因组为模板，利用PCR技术进行扩增。结果表明：植物乳杆菌素LB-B1的基因簇与片球菌素PA-1/AcH的同源性达到99%。并进一步对植物乳杆菌LB-B1中的质粒进行了鉴定。.（5）敏感菌株植物乳杆菌WQ0815中ElltMan的IID功能鉴定：采用同源重组技术，将对植物乳杆菌素LB-B1敏感的植物乳杆菌WQ0815中的IID进行突变，突变株对植物乳杆菌素LB-B1产生抗性，说明敏感菌株中ElltMan的IID是植物乳杆菌素LB-B1发挥抑菌作用时的结合位点。