核糖体亚基结合蛋白hCINAP调节p53蛋白活性的机制研究

肿瘤抑制因子p53在肿瘤发生发展中具有重要调控作用。核糖体亚基蛋白（RPs）-HDM2-p53是最近发现的影响p53活性的一条新的通路。鉴定新的参与到该通路中的核糖体亚基蛋白以及该通路的上游调控因子对于深入了解p53的调控机制和治疗肿瘤具有重要的生物学意义。人类蛋白hCINAP在真核生物体内是一个非常保守的蛋白，本研究发现人类蛋白hCINAP可能与一些核糖体亚基蛋白、RNA剪接因子以及癌症相关蛋白相互作用。免疫共沉淀以及体外pull-down实验证明hCINAP与核糖体小亚基蛋白RPS14有很强的相互作用。过表达RPS14能够抑制HDM2并促进p53的稳定性和活性。hCINAP能明显抑制由RPS14介导的p53的稳定性和活性。hCINAP通过招募去NEDDylation酶NEDP1来抑制RPS14的NEDDylation，导致RPS14的亚细胞定位发生改变和稳定性降低，从而使RPS14与HDM2的相互作用减弱，释放更多游离的HDM2结合p53，引起p53的泛素化降解。我们还发现hCINAP的另一个相互作用蛋白RPL6在调节p53活性中也具有重要的功能。当细胞处于核糖体压力刺激时，核糖体蛋白RPL6会从核仁内释放到核质中结合HDM2，并抑制HDM2介导的p53泛素化修饰和降解，从而增强p53蛋白的稳定性和活性，最终引发p53 依赖的细胞周期阻滞和细胞生长抑制。HDM2能使RPL6发生泛素化修饰和降解，减弱RPL6与HDM2的结合，从而形成一条负反馈调节机制，使得p53回复到正常水平。这些结果不仅发现了新的核糖体亚基蛋白RPS14和RPL6在RP-HDM2-p53通路中的调节作用，更为重要的是，我们还证明hCINAP是这条通路上游的一个重要调节蛋白。.基于hCINAP与核糖体亚基蛋白的作用关系，我们还发现hCINAP对于核糖体18S rRNA的剪切、成熟以及核糖体40S 小亚基的组装以及细胞整体蛋白的合成是必需的。其调节作用与hCINAP的ATPase酶活性紧密相关。hCINAP在肿瘤细胞周期、凋亡和增殖中具有重要的调控作用。.此外，本课题还揭示了hCINAP在NF-κB信号通路中的负调控作用，阐明了hCINAP通过招募PP1来抑制IKK磷酸化的分子机制。拓展了我们对于hCINAP生物学功能的认识，有助于进一步了解hCINAP在免疫疾病和肿瘤中的作用和机制。