Molekulargenetische und biochemische Charakterisierung des pflanzlichen Mus81/Eme Endonuklease Komplexes

Mus 81/Eme复合体在DNA修复和微生物学重组中发挥了重要作用。我们在拟南芥同源基因MUS 81和EME中进行了鉴定和转录。有趣的是，EME基因在大肠杆菌中是重复的（AtEME 1，AtEME 2;蛋白质鉴定为63%）。为了进一步研究拟南芥Mus 81/Eme 1异源复合体的核酸内切酶活性。在Mus 81/Eme 2中，生物化学特性与复杂的分析韦尔登相关。在Spalthefe spezifisch Holliday Junction（HJ）-Resolvaseaktivität or der eher wie in Bäckerhefe Endonukleaseaktivität aufweisen or der sich sogar untereinander in der Aktivität unterscheiden中，通过复杂的模拟，可以解决Substratspezifität sollen Aufschluss darüber geben的问题。接下来我们将对A.突变体MUS 81-Hintergrund的基因组不稳定性与拟南芥的基因组不稳定性有关，这与体内内源基因的功能相似，韦尔登的内源基因的功能相似。大北将与转基因睾丸素的支持者一起进行Endonuklease的Beteiligung和versatiedenen Rekombinationswegen（extra-，intra-and interchromosomale sowie meiotische Rekombination）。AtEME 1和AtEME 2基因的表达也存在差异，因此，只有通过RNA干扰技术才能对一个插入突变基因Pflanzen的插入突变进行检测，并通过韦尔登干扰来检测。Schließlich soll mittels biochemischer and genetischer Ansätze versucht韦尔登Interaktionen der Endonuklease-Komplex mit anderen in DNA Rekombinationsprozesse involvierten Proteinen，wie zum Beispiel den RecQ-Helikasen，nachzuweisen.

Der Mus81/Eme Komplex spielt bei allen daraufhin untersuchten Eukaryonten in der DNA Reparatur und meiotischen Rekombination eine entscheidende Rolle. Wir konnten in Arabidopsis thaliana homologe Gene von MUS81 und EME identifizieren und deren Transkription nachweisen. Interessanterweise liegt das EME Gen im Arabidopsisgenom dupliziert vor (AtEME1, AtEME2; Proteinidentität 63%). In Voruntersuchungen konnten wir die endonukleolytische Aktivität eines heteromeren Komplexes aus Mus81/Eme1 von Arabidopsis in vitro nachweisen. Nun soll die biochemische Charakterisierung dieses Komplexes vorangetrieben und dabei im Vergleich zu Mus81/Eme2 die Substratspezifität beider Komplexe analysiert werden. Die Untersuchungen zur Substratspezifität sollen Aufschluss darüber geben, ob die Komplexe analog zu dem der Spalthefe spezifisch Holliday Junction (HJ)-Resolvaseaktivität oder eher wie in Bäckerhefe Endonukleaseaktivität aufweisen oder sich sogar untereinander in der Aktivität unterscheiden. Nachdem wir mehrere Insertions-mutanten von A. thaliana isoliert und bereits Hinweise auf genomische Instabilitäten im mutanten MUS81-Hintergrund erhalten haben, soll parallel die Funktion dieser Endonuklease in vivo geklärt werden. Dabei wird mit Hilfe von transgenen Testerlinien die Beteiligung der Endonuklease an verschiedenen Rekombinationswegen (extra-, intra- und interchromosomale sowie meiotische Rekombination) geprüft. Da AtEME1 und AtEME2 eng gekoppelt sind, sollen neben der Untersuchung an Insertionsmutanten der einzelnen Gene Pflanzen mit RNA-Interferenz Konstrukten hergestellt und untersucht werden, bei denen die Expression beider EME-Gene ausgeschaltet ist. Schließlich soll mittels biochemischer und genetischer Ansätze versucht werden Interaktionen der Endonuklease-Komplexe mit anderen in DNA-Rekombinationsprozesse involvierten Proteinen, wie zum Beispiel den RecQ-Helikasen, nachzuweisen.