Polypeptide dynamics and structure studied simultaneously by collision-induced fluorescence quenching and resonance energy transfer in the 10-Å domain

我们计划开发和应用一种新的方法来测定多肽的动力学和构象.该方法基于2，3-二氮杂双环[2.2.2]辛-2-烯（Dbo），该有机发色团在wässriger Lösung中具有较长的链节。在与色氨酸（Trp）的组合中，Dbo可以使两种蛋白质韦尔登。1)在UV中选择性地插入Dbo后，通过Trp碰撞将其吸收，从而使Löschung Informationen的效率提高到肽的可吸收性。2)在280 nm波长下，可以选择性地吸收韦尔登的光，而通过能量转移韦尔登，可以从Dbo上吸收光。在10公里外的最小前半径处，这条河的最大半径是韦尔登。我们将进一步改进组合方法，如Koadditiven和明胶及疏水Seitenketten的肽会产生影响。因此，我们将用反应性Dbo衍生物对蛋白质进行特异性标记，以确定Kettendynamik和结构，z.B.让我们一起来欣赏这首歌吧，它有着更好的节奏和节奏感。

Wir planen die Entwicklung und Anwendung einer photophysikalischen Methode zur simultanen Bestimmung der Kettendynamik und -konformation von Polypeptiden. Die Methode basiert auf 2,3-Diazabicyclo[2.2.2]oct-2-en (Dbo), dem organischen Chromophor mit der längsten Fluoreszenzlebensdauer in wässriger Lösung. In Kombination mit Tryptophan (Trp) kann Dbo auf zwei Weisen verwendet werden. 1) Nach selektiver Anregung im nahen UV wird die Fluoreszenz von Dbo durch Trp kollisionsinduziert gelöscht, wobei die Effizienz der Löschung Informationen über die Flexibilität der Peptidkette liefert. 2) Umgekehrt kann Trp ebenfalls selektiv (bei 280nm) zur Fluoreszenz angeregt werden, welches wiederum von Dbo durch entfernungsabhängigen Energietransfer gelöscht werden kann. Aufgrund des sehr kleinen Försterradius von 10Å können auf diese Weise sehr kurze Abstände bestimmt werden. Durch die Kombination der beiden Methoden möchten wir aufklären, wie die Peptidkette von Koadditiven und von geladenen und hydrophoben Seitenketten beeinflusst wird. Zudem werden wir reaktive Dbo-Derivate zur spezifischen Markierung von Proteinen entwickeln, um die Änderungen der Kettendynamik und -struktur, z.B. während der Faltung, mit hoher räumlicher und zeitlicher Auflösung zu messen.