Investigations into Pentachloropseudilin biosynthesis

苯基吡咯衍生物五氯伪地林（Pentachlorpseudilin）产自游动放线菌（Actinoplanes sp.）生物合成还不够好。Für die Einführung der fünf Chloratome sind Hybridisierungsversuchen zufolge NADH-abhängige Halogenasen verantwortlich.利用吡咯氮菌素生物合成的卤代酶基因建立韦尔登生产的Cosmid基因库。插入-DNA阳性克隆可进行亚克隆和测序韦尔登，并可对第一优先级的卤代酶基因进行测序。因此，生物合成基因的聚集，可以通过卤代酶基因组来使生物合成基因韦尔登。Vorrangig soll die Frage beantwortet韦尔登，ob für die Chlorierung des Pyrrolrings dasselbe Enzym verantwortlich ist，wie für die Chlorierung des Phenol-Teils.在体外培养体系中，卤代酶的活性可以在体外得到表达，并产生酶的活性和韦尔登。这是韦尔登的基础，通过对“基因置换”或核酶突变的基因组测序，来鉴定生物合成簇中的基因，并为进一步的生物合成奠定基础。

Das Phenylpyrrol-Derivat Pentachlorpseudilin wird von Actinoplanes sp. produziert. Über die Biosynthese ist bisher noch nichts bekannt. Für die Einführung der fünf Chloratome sind Hybridisierungsversuchen zufolge NADH-abhängige Halogenasen verantwortlich. Mit Hilfe eines Halogenase-Gens aus der Pyrrolnitrin-Biosynthese als Sonde soll eine Cosmid-Genbank des Produzenten gescreent werden. Die Insert-DNA positiver Klone soll subkloniert und sequenziert werden, wobei der Sequenzierung des Halogenase-Gens die erste Priorität gilt. Da zu erwarten ist, daß die Biosynthese-Gene geclustert vorliegen, könnte durch das Halogenase-Gen Zugang zu den anderen Biosynthese-Genen erhalten werden. Vorrangig soll die Frage beantwortet werden, ob für die Chlorierung des Pyrrolrings dasselbe Enzym verantwortlich ist, wie für die Chlorierung des Phenol-Teils. Durch Expression der Halogenase(n) in geeigneten Wirtsystemen soll die HalogenaseAktivität in vitro nachgewiesen und das (die) entsprechenden Enzym(e) gereinigt und charakterisiert werden. Es soll versucht werden, auf der Basis der Sequenz-Daten mit Hilfe von 'gene replacement' oder Ribozymen Mutanten zu erhalten, um die zum Biosynthese-Cluster gehörenden Gene zu identifizieren und somit die Voraussetzungen für die Aufklärung der Biosynthese zu schaffen.