Molekulare Charakterisierung des Calicivirus "Rabbit Hemorrhagic Disease Virus" (RHDV) und "Felines Calicivirus" (FCV)

Caliciviren besitzen ein einzelsträngiges RNA Genom positive Polarität，das mindestens zwei offene Leseraster enthält. Leseraster #1将在一个多聚蛋白酶中，从蛋白酶中分离出韦尔登。在第一个三个Antragsperioden wurde eine Genomkarte für den Erreger der hämorrhagischen Kaninchenseuche（RHDV）erstelt.本文通过对RHDV蛋白的体外翻译、感染原代肝细胞和在痘苗病毒系统中的瞬时表达进行了研究。在这个基因组中，通过对中间病毒蛋白的分析，可以进一步了解Lücke韦尔登。测序分析可用于确定病毒蛋白酶的表达水平，以确定病毒蛋白酶在病毒多聚蛋白韦尔登中的拉格和梯度。随后的基因突变分析证实了这一点。在接下来的分析中，我们最好能通过韦尔登来确定Spaltstelle的准确性。在真核细胞分析韦尔登中，通过瞬时Spaltstellen试验，我们可以解决多聚蛋白的动力学和突变的影响。

Caliciviren besitzen ein einzelsträngiges RNA Genom positiver Polarität, das mindestens zwei offene Leseraster enthält. Leseraster #1 wird in ein Polyprotein translatiert, aus dem durch Proteasespaltung virale Proteine freigesetzt werden. In den ersten drei Antragsperioden wurde eine Genomkarte für den Erreger der hämorrhagischen Kaninchenseuche (RHDV) erstellt. Dazu diente die Herstellung spezifischer Antikörper und deren Einsatz zum Nachweis von RHDV Proteinen, die nach in vitro Translation, Infektion von primären Hepatozyten und transienter Expression im Vaccinia Virussystem erhalten wurden. In dieser Genomkarte soll die letzte noch verbliebene Lücke durch Darstellung des entsprechenden Virusproteins geschlossen werden. Durch Sequenzanalysen konnte basierend auf Kenntnissen zur Präferenz der viralen Protease für bestimmte Aminosäuren an der Spaltstelle und der ungefähren Lage und Größe der viralen Proteine eine Reihe potentieller Spaltstellen im viralen Polyprotein ermittelt werden. Durch Mutationsanalyse wurden vermutlich alle bis auf eine Schnittstelle nachgewiesen. In der folgenden Antragsperiode soll die verbleibende Spaltstelle identifizert und durch Mutationsanalyse bestätigt werden. Darüber hinaus sollen die Kinetik der Polyproteinprozessierung und die Einflüsse von Mutationen im Bereich einzelnen Spaltstellen im transienten Assay in der eukaryontischen Zelle analysiert werden.